Page 82 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第7期
·1012 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年7月

A HG B 1.0 C 0.20
NC HG GE GE+CC 0.8 #
p⁃AMPK 62 kDa 0.6 * *# **△ 0.15
AMPK 62 kDa p⁃AMPK/AMPK 0.4 LC3BⅡ/LC3BⅠ 0.10 * *△
LC3BⅡ 16 kDa 0.2 0.05
LC3BⅠ 14 kDa
0 0
Beclin1 60 kDa
NC HG HG+GE NC HG HG+GE
P62 62 kDa HG+GE+CC HG+GE+CC
α⁃tublin 50 kDa

D E
1.5 # 0.8 ***
Beclin1/α⁃tublin 1.0 ** **△ P62/α⁃tublin 0.6 *### ##△
0.4
0.5

0 0.2 0
NC HG HG+GE NC HG HG+GE
HG+GE+CC
HG+GE+CC
A：Western blot 检测p⁃AMPK、AMPK、LC3B、Beclin1、P62的表达；B：p⁃AMPK/AMPK 蛋白相对表达水平；C：LC3BⅡ/Ⅰ蛋白相对表达水平；
D：Beclin1蛋白相对表达水平；E：P62蛋白相对表达水平。与NC 组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001；与STZ组比较，P < 0.05，P < 0.01，
##
#
**
*
***
P < 0.001；与HG+GE 组比较，P < 0.05（n=4）。
### △
图7 栀子苷能够激活H9C2细胞中AMPK介导的自噬
Figure 7 Geniposide can activate AMPK⁃mediated autophagy in H9C2 cells
常重要。高糖环境下，自噬水平的下调会破坏心肌 明栀子苷可能通过激活AMPK介导的自噬减轻1型
细胞的生理稳态，导致大量受损和老化的线粒体积 糖尿病小鼠的心肌损伤。王振等 ［25］ 研究发现，通过
聚，最终导致心肌纤维化 ［18］ 。研究表明，LC3B、P62、 调控AMPK/mTOR通路能够抑制大鼠髓核细胞的凋
Beclin1 可以用来衡量自噬的程度 ［19-22］ 。在本研究 亡。Sun等 ［26］ 研究也表明通过激活AMPK 可以抑制
中，与 STZ 组相比，GE25 组和 GE50 组可以上调 心肌细胞凋亡。栀子苷调控AMPK与心肌细胞凋亡
LC3BⅡ/Ⅰ和 Beclin1 的蛋白表达水平，下调 P62 蛋 的确切关系值得进一步研究。
白的表达水平，表明栀子苷改善 1 型糖尿病小鼠心 凋亡信号的刺激致使 BAX/BCL2 表达比例升
肌损伤可能与促进心肌自噬有关。 高，造成线粒体膜电位下降，进而启动细胞的凋亡
本课题组之前的研究表明，通过活化 AMPK 途 执行通路，激活 Caspase3 级联通路，导致细胞凋亡
径可以增加心肌自噬进而保护心肌细胞 ［23］ 。作为 的 发 生 ［27］ 。 本 研 究 显 示 STZ 组 BAX/BCL2 和
自噬进程的关键启动者，AMPK对心脏的生存和功能 Cleaved caspase3/Caspase3 比值明显升高，表明在
［24］
至关重要。AMPK 活化后可以负向调控 mTOR 。 1 型糖尿病小鼠中凋亡增强，而栀子苷处理后减轻
通过调控 AMPK/mTOR 信号通路促进自噬，改善糖 了细胞凋亡程度，张伟萍等 ［28］ 研究显示栀子苷预处
尿病大鼠的心肌纤维化 。本研究中，GE25 组和 理可以减轻 2 型糖尿病心肌病大鼠的心肌细胞凋
［6］
GE50 组 p⁃AMPK/AMPK 的蛋白表达水平升高，p⁃ 亡，提示栀子苷可能通过抑制心肌细胞凋亡改善1型
mTOR/mTOR 的蛋白表达水平降低，表明栀子苷可 和2型糖尿病心肌损伤。
能通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬进而改善糖 综上所述，本研究提示栀子苷能改善 1 型糖尿
尿病心肌损伤。为进一步探讨栀子苷对AMPK的激 病心肌病的心肌损伤，减轻心肌纤维化，其机制可
活作用及 AMPK 对自噬的直接抑制作用，本研究在 能与激活AMPK介导的自噬有关。本研究还对栀子
细胞实验中使用了 AMPK 抑制剂 Compound C。研 苷的心肌保护作用与细胞凋亡的相关性进行了初

究结果表明，与HG组相比，栀子苷预处理后，AMPK 步探索。但本研究仍然存在一些不足，如未探讨栀
被激活，同时上调自噬，而使用 AMPK 抑制剂处理 子苷的最佳剂量和治疗时间等。栀子苷改善糖尿
后，可以阻断 AMPK 激活，LC3B、Beclin1 的表达降 病心肌病的确切分子机制和特异性靶点还有待进
低，P62 表达升高，同时阻断对自噬的激活作用，表 一步研究。