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第41卷第7期 朱亚文，陈 忠. 栀子苷对1型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用和机制研究［J］.
2021年7月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（07）：1006-1014 ·1007 ·

mg/kg or 50 mg/kg reversed these changes. In cell experiments，geniposide pretreatment activated AMPK（increased p⁃AMPK/AMPK
ratio）and autophagy activity（increased LC3BⅡ/Ⅰ，decreased expression of P62），and this effect was blocked by AMPK inhibitor
Compound C. Conclusion：Geniposide can improve myocardial injury and reduce myocardial fibrosis in type 1 diabetic mice. The
mechanism may be related to the activation of AMPK⁃mediated autophagy.
［Key words］ geniposide；autophagy；AMPK；type 1 diabetes
［J Nanjing Med Univ，2021，41（07）：1006⁃1014］

糖尿病性心肌病是一种独立于冠心病和高血 尔生物科技有限公司）；苏木精⁃伊红（HE）染色液
压的心肌功能障碍，是糖尿病患者心力衰竭的主要 （江苏碧云天生物技术研究所）；BCA蛋白定量试剂
［1］
原因之一 。心肌纤维化是糖尿病性心肌病的主要 盒、抗α⁃tublin 抗体（上海碧云天生物科技有限公
病理改变，会导致心功能不全，最终发展为心力衰 司）；CCK⁃8 试剂盒（同仁公司，日本）；抗 Beclin1、
竭甚至猝死 ［2-3］ 。糖尿病心肌病的发展与自噬、氧化 BCL2、BAX、Cleaved⁃caspase 3、Caspase3、p⁃AMPK、
应激、炎症、心肌纤维化和心肌凋亡等多种分子机 AMPK抗体（CST公司，美国）；抗P62、LC3B抗体（武
制有关 ［4-6］ 。然而，糖尿病性心肌病确切的分子机制 汉爱博泰克生物科技有限公司）；抗 Collagen Ⅰ、
仍有待阐明。 Collagen Ⅲ、mTOR、p⁃mTOR 抗体（Abcam 公司，美
自噬是一种高度保守的分解代谢过程，在维 国）。
［7］
持细胞内稳态方面发挥重要作用 。自噬也积极 1.2 方法
［8］
参与各种心脏疾病，包括糖尿病心肌病 。AMPK 1.2.1 动物实验分组及模型制备
是生物能量代谢的关键调节分子，也是经典的自 32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组：对照组
［9］
噬上游调节因子，AMPK 的激活导致自噬上调 。 （Con组）、1型糖尿病模型组（STZ组）、25 mg/kg栀子
相关研究表明，AMPK 对心脏的生存和功能至关重 苷给药组（GE25 组）、50 mg/kg 栀子苷给药组（GE50
要，激活 AMPK 介导的自噬可以减轻糖尿病心肌 组），每组 8 只。STZ组及栀子苷给药组小鼠腹腔注
病 ［10-11］ 。 射STZ［60 mg（kg·d）］连续6 d，制备1型糖尿病小鼠
栀子苷是一种典型的环烯醚萜苷类化合物，具 模型。正常饲养1周后，用血糖仪检测空腹血糖，血
有多种传统植物药的生物学效应 ［12］ 。在异丙肾上 糖值≥16.7 mmol/L即认为建模成功。对照组小鼠腹
腺素诱导的小鼠心肌纤维化模型中，栀子苷可以改 腔注射等量柠檬酸缓冲液。模型成功后，栀子苷给
善模型小鼠的心肌纤维化和功能障碍 ［13］ 。栀子苷 药组连续灌胃给药 4 周，对照组和 STZ 组灌胃等量
作为胰高血糖素样肽1（glucagon⁃like peptide⁃1，GLP 生理盐水。
⁃1）受体激动剂，通过激活AMPK对多种心脏疾病都 1.2.2 HE和Masson染色
具有保护作用 ［14-16］ 。本研究通过建立1型糖尿病小 小鼠麻醉后，取出小鼠心脏冲洗后浸泡在 4%
鼠模型，拟验证栀子苷对 1 型糖尿病小鼠心肌损伤 多聚甲醛溶液中固定过夜。取固定好的心脏组织
的保护作用，并进一步探讨栀子苷是否通过激活 石蜡包埋和切片。HE 染色：切片经烤片，脱蜡水
AMPK 介导的自噬改善糖尿病心肌病心肌损伤，为 化，苏木精染色 5 min，伊红染色 10 min，自来水冲
临床治疗糖尿病心肌病提供理论依据。 洗，脱水透明，中性树脂封片。Masson 染色：根据
Masson试剂盒说明书进行染色，在光学显微镜下观
1 材料和方法
察心肌组织病理学的变化。用 Image J 软件测定胶
1.1 材料 原容积分数（collagen volume fration，CVF）。
32 只体重 20~25 g 的 C57BL/6J 雄性小鼠（上海 1.2.3 免疫组化分析
南方模式生物科技股份有限公司），动物实验符合 将石蜡包埋组织脱蜡，抗原修复，封闭液封闭
3R原则（伦理批文编号：2020⁃0328）。栀子苷（上海 30 min 后，分别与一抗 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、P62
融禾医药科技发展有限公司，批号：200403）；链脲 和 LC3B 抗体在 4 ℃孵育过夜。PBS 洗涤后，将切

佐菌素、戊巴比妥钠、AMPK 抑制剂 Compound C 片与二抗在 37 ℃孵育 1 h，DAB 染色，苏木素复染、
（Sigma 公司，美国）；Masson 染色试剂盒（武汉赛维 脱水、透明、封片，在光学显微镜下观察拍摄图像。