Page 60 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第9期
·1326 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年9月

NC组 WNT7b⁃siRNA组
3 讨 论
E⁃Cadherin -135 kDa
恶性黑素瘤进展极快，且对放疗及化疗不敏
N⁃Cadherin -140 kDa
感。临床上早期恶性黑素瘤患者通过手术切除，其
Vimentin -57 kDa
5 年总体生存率达 95％以上，但对于中晚期黑素瘤
Snail -29 kDa 患者来说，目前还没有有效的治疗方法能显著延长患
［13］
FOXC2 -56 kDa 者生存期 。近年来免疫治疗与基因靶向治疗手段
发展迅速，主要包括免疫检查点抑制剂疗法 ［14-15］ 和
GAPDH -36 kDa
MAPK/ERK 细胞信号通路抑制剂 ［16］ ，但单一治疗效
图5 敲低WNT7b对A375细胞EMT 相关标记蛋白表达的
果欠佳。研究显示，联合两种及两种以上不同作用
影响
Figure 5 Effects of WNT7b knockdown on EMT markers 机制的方法或药物治疗的效果比单一治疗有明显
of A375 cell 提升 ［17-19］ 。因此，在深入探究恶性黑素瘤发病机制、
寻找更有效的治疗靶点基础上，为患者提供精准的
因子 ［11- 12］ 。因此我们通过 Western blot 对 NC 组与 治疗方案成为未来发展的方向。
WNT7b⁃siRNA 组中与黑素瘤发生发展密切相关的 经典WNT信号通路也叫Wnt/β⁃catenin途径，通
MMP⁃2、MMP⁃3、MMP⁃7和MMP⁃9进行检测，结果发 过调节LEF/TCF家族DNA转录来调节细胞的行为，
现MMP⁃2、MMP⁃7及MMP⁃9表达降低，其中MMP⁃9 其核心是胞质内 β⁃catenin的稳定性，β⁃catenin水平
降低最显著（图6A），进而通过免疫荧光分析对MMP⁃ 低下时，Wnt 通路关闭；当其水平较高时，Wnt 通路
9的降低进行了验证（图6B）。说明WNT7b可能通过 开放。近年研究发现，恶性黑素瘤的高侵袭转移倾
MMP影响A375细胞的迁移、侵袭与EMT过程。 向与 WNT 信号通路的异常激活有关 。在 WNT 蛋
［6］
A
NC组 WNT7b⁃siRNA组
MMP⁃2 -72 kDa

MMP⁃3 -60 kDa

MMP⁃7 -29 kDa
MMP⁃9 -92 kDa
GAPDH -36 kDa

B MMP9 WNT7b DAPI Merge

NC组

WNT7b⁃siRNA组

A：Western blott检测A375细胞中MMP家族蛋白的表达；B：免疫荧光检测A375细胞中WNT7b和MMP⁃9蛋白的表达（×400）。
图6 敲低WNT7b对A375细胞MMP家族成员表达的影响
Figure 6 Effects of WWT76 knockdown on MMP members of A375 cells