Page 7 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第9期 南京医科大学学报（自然科学版）
2021年9月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·1273 ·

·基础研究·

CDDO⁃Me对缺氧诱导的肺动脉外膜成纤维细胞活化的影响

彭丽瑶 ，魏桂红 ，黄张建 ，孔 辉 ，解卫平 1*
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南京医科大学第一附属医院呼吸与危重症学科，江苏 南京 210029；中国药科大学新药研究中心天然药物活性组分与药
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效国家重点实验室，江苏 南京 210009

［摘 要］ 目的：探索甲基巴多索隆（bardoxolone methyl，CDDO⁃Me）对缺氧诱导的人肺动脉外膜成纤维细胞（pulmonary artery
adventitia fibroblast，PAAF）活化的影响及其相关机制。方法：体外培养人PAAF，随机分为常氧组（21%O2 ）、缺氧组（1%O2 ）、缺
氧+ CDDO⁃Me组和常氧+CDDO⁃Me组。采用CCK⁃8法检测细胞活力；Transwell实验检测细胞迁移；DCFH⁃DA荧光探针检测细
胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平，ELISA 试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（malondialdehyde，
MDA）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）含量以及细胞上清液中转化生长因子（transforming growth factor，TGF）⁃β1、
肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）⁃α、白细胞介素（interleukin，IL）⁃1β表达水平；免疫荧光法观察细胞内α⁃平滑肌肌动蛋
白（α⁃smooth muscle actin，α⁃SMA）表达以及核因子κB（nuclear factor kappa⁃B，NF⁃κB）p65核转位情况；Western blot检测细胞内
α⁃SMA、Ⅰ型胶原蛋白、波形蛋白表达以及Smad3、p65磷酸化水平。结果：CDDO⁃Me（62.5、125.0、250.0、500.0 nmol/L）可以浓度依
赖性地降低缺氧诱导的PAAF细胞活力的升高，并在250.0 nmol/L和500.0 nmol/L时具有显著抑制作用。CDDO⁃Me（500.0 nmol/L）
可以抑制缺氧诱导的PAAF迁移以及肌成纤维细胞转化，恢复细胞形态，抑制缺氧诱导的PAAF中α⁃SMA、Ⅰ型胶原蛋白和波
形蛋白表达水平的升高。在缺氧条件下，CDDO⁃Me（500.0 nmol/L）显著降低PAAF中ROS和MDA水平，升高GSH和SOD含量，
提高细胞抗氧化应激能力。CDDO⁃Me（500.0 nmol/L）可以抑制缺氧诱导的 PAAF 中细胞因子 TGF⁃β1 的分泌，抑制 TGF⁃β1/
Smad3信号通路的激活。此外，CDDO⁃Me（500.0 nmol/L）还可以抑制缺氧诱导的PAAF中NF⁃κB（p65）的核转位及其磷酸化，并
抑制其下游炎症因子 TNF⁃α和 IL⁃1β的表达。结论：CDDO⁃Me 可以抑制缺氧诱导的 PAAF 增殖、迁移以及向肌成纤维细胞转
化，提高PAAF抗氧化应激能力，并抑制TGF⁃β1/Smad3信号通路和NF⁃κB信号通路。
［关键词］ 肺动脉高压；CDDO⁃Me；肺动脉外膜成纤维细胞；缺氧
［中图分类号］ R363 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2021）09⁃1273⁃08
doi：10.7655/NYDXBNS20210901

Effects of CDDO ⁃ Me on hypoxia ⁃ induced activation of human pulmonary adventitia
fibroblasts

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PENG Liyao ，WEI Guihong ，HUANG Zhangjian ，KONG Hui ，XIE Weiping 1*
Department of Pulmonary and Critical Care Medicine，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，
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Nanjing 210029；State Key Laboratory of Natural Medicines，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，
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China
［Abstract］ Objective：This study aims to investigate the effect of bardoxolone methyl （CDDO ⁃ Me）on the hypoxia ⁃ induced
activation of human pulmonary artery adventitia fibroblasts（PAAF）and potential mechanism. Methods：Human PAAF were cultured in
vitro and randomly divided into four groups：the normoxia group（21% oxygen），the hypoxia group（1% oxygen），the hypoxia plus CDDO⁃Me
group and the normoxia plus CDDO⁃Me group. Cell viability was determined by CCK⁃8 assay. Transwell assay was carried out to assess
cell migration. The levels of reactive oxygen species（ROS），malondialdehyde（MDA），glutathione（GSH）and superoxide dismutase
（SOD）were detected to evaluate the level of oxidative stress. The levels of transforming growth factor（TGF）⁃β1，tumor necrosis factor
（TNF）⁃α and interleukin（IL）⁃1β were detected by ELISA assay. The expression of α⁃smooth muscle actin（α⁃SMA）and nuclear

［基金项目］ 国家科技重大专项（2018ZX10722301）；国家自然科学基金（81273571，81870054）；江苏省卫生厅重点项目
（H201601）
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通信作者（Corresponding author），E⁃mail：wpxie@njmu.edu.cn