Page 10 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 10

第41卷第9期
               ·1276 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年9月


              A                             C                                           D
                  150                                 常氧组                 缺氧组                5      *
                  （ % ）  100                                                                 4 3
                  细胞活力  50                                                                  细胞相对迁移率  2 1  *#



                    0                                                                        0
                                                                                                   常氧+CDDO⁃Me组
                       0 62.5125.0250.0 500.0
                       CDDO⁃Me（nmol/L）                                                       常氧组  缺氧组
              B   200                             缺氧+CDDO⁃Me组         常氧+CDDO⁃Me组               缺氧+CDDO⁃Me组
                  （ % ）  150  *  *  *  *#  *#
                  细胞活力  100
                   50
                    0
                  缺氧 -   +  +  +  +  -
               CDDO⁃Me  0  0  62.5  125.0  250.0  500.0
               （nmol/L）
                  A、B：CCK⁃8检测细胞活力；C、D：Transwell实验检测细胞迁移能力（×100）。与常氧组比较，P < 0.05；与缺氧组比较，P < 0.05（n=3）。
                                                                               *
                                                                                                #
                                       图1 CDDO⁃Me对缺氧诱导的PAAF细胞活力和迁移的影响
                           Figure 1 Effects of CDDO⁃Me on the viability and migration of PAAF induced by hypoxia
              PAAF呈现细长纺锤状，细胞整体长度较长，宽度较                          子TGF⁃β1水平显著升高，Smad3磷酸化水平显著上
              窄。在缺氧刺激24 h后，PAAF的胞体宽度增加，细                        调（P < 0.05）。与缺氧组相比，缺氧+CDDO⁃Me 组
              胞呈现肥大改变，而缺氧+CDDO⁃Me 组的 PAAF 细                     PAAF 的 TGF⁃β1 表达水平以及 Smad3 磷酸化水平
              胞肥大程度得到改善。同时，细胞免疫荧光结果显                            显著下降（P < 0.05）。以上结果提示，CDDO⁃Me 可
              示（图2B），与常氧组相比，缺氧组PAAF内α⁃SMA荧                      以抑制缺氧诱导的 PAAF 中 TGF⁃β1/Smad3 信号通
              光强度增强，而缺氧+CDDO⁃Me 组α⁃SMA 荧光强度                     路的激活。
              相较于缺氧组显著减弱。Western blot 半定量结果                     2.5  CDDO⁃Me 对缺氧诱导的 PAAF 中 NF⁃κB 信号
              进一步表明，缺氧可以显著上调 PAAF 中肌成纤维                         通路的影响
              细胞标志物 Collagen Ⅰ、Vimentin 和α⁃SMA 的表达                   免疫荧光结果显示（图5A），常氧组PAAF中NF⁃
              水平，与常氧组相比差异有统计学意义（P < 0.05，图                      κB（p65）主要表达于细胞质中，缺氧组 NF⁃κB 主要
              2C~E）。而缺氧+CDDO⁃Me 组PAAF 的Collagen Ⅰ、              表达于细胞核中，表明缺氧可诱导NF⁃κB向细胞核转
              Vimentin和α⁃SMA的表达水平与缺氧组相比显著下                      位，而 CDDO⁃Me 处理后可抑制上述改变。Western
              降（P < 0.05）。以上结果表明，CDDO⁃Me 可以抑制                   blot和ELISA结果进一步表明，与对照组相比，缺氧
              缺氧诱导的PAAF向肌成纤维细胞转化。                               组 PAAF 中 NF⁃κB 磷酸化蛋白水平显著上调，同时
              2.3 CDDO⁃Me对缺氧诱导的PAAF氧化应激的影响                      NF⁃κB 信号通路下游靶基因 IL⁃1β和 TNF⁃α的表达
                  ROS 检测结果显示，与对照组相比，缺氧组                         水平显著升高（P < 0.05，图5B~D）。与缺氧组相比，
              PAAF 中 ROS 荧光强度显著增强（P < 0.05，图 3A、                CDDO⁃Me处理可以显著降低NF⁃κB磷酸化水平，并
              B），提示缺氧显著上调细胞内 ROS 水平，而 CDDO⁃                     下调IL⁃1β和TNF⁃α的表达水平（P < 0.05）。以上结
              Me可显著抑制缺氧诱导的ROS升高，与缺氧组相比                          果表明，CDDO⁃Me可以抑制缺氧诱导的PAAF中NF
              差异有统计学意义（P < 0.05）。此外，缺氧刺激24 h                    ⁃κB信号通路的激活。
              后，PAAF 中反映细胞氧化损伤程度的重要指标
                                                                3  讨 论
              MDA 的表达水平显著上调，发挥细胞抗氧化作用的
              GSH和SOD表达水平显著下调（P < 0.05，图3C~E）。                       肺血管重构是PAH特征性的病理改变，涉及肺
              与缺氧组相比，CDDO⁃Me可以显著抑制缺氧诱导的                         血管内膜和中膜增厚以及血管外膜的纤维化。肺
              MDA产生，并上调GSH和SOD表达水平（P < 0.05）。                   动脉内皮细胞功能障碍和平滑肌细胞过度增殖是

              2.4  CDDO⁃Me 对缺氧诱导的 PAAF 中 TGF⁃ β1/               PAH的研究重点，而成纤维细胞作为血管外膜最丰
              Smad3信号通路的影响                                      富的细胞成分，其在PAH发生发展中的作用常被忽
                  ELISA（图 4A）及 Western blot 结果（图 4B）显           略。近年来越来越多的研究表明，在响应损伤和应
              示，与对照组相比，缺氧组PAAF合成分泌的细胞因                          激时，血管外膜成纤维细胞最先被激活，在肺循环
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