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第42卷第11期 丁文筱，张 蔷，丁 宁，等. 球形脂联素对间歇低氧所致H9C2细胞损伤的保护作用及机制［J］.
2022年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（11）：1523-1529，1538 ·1525 ·

行实验干预后，消化、离心收集 H9C2 细胞。0.5 mL GTT⁃3′；对照 siRNA 序列为 5′⁃UUCUCCGAACGU⁃
培养液重悬细胞，加入0.5 mL JC⁃1染色工作液37 ℃ GUCACGUTT⁃3′和 5′⁃ACGUGACACGUUCGGAGA⁃
孵育20 min，600 g离心4 min。采用JC⁃1缓冲液洗涤 ATT⁃3′。
2次后，重悬细胞，荧光分光光度计检测MMP。 1.3 统计学方法
1.2.6 蛋白表达检测 采用 Graphpad 7.0 统计软件进行分析，符合正
按照蛋白提取试剂盒说明书提取 H9C2 心肌 态分布的计量资料采用均数±标准差（x ± s）表示。
细胞蛋白，使用蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度。 符合正态分布、方差齐性，多组间比较采用单因素
取 30 μg 蛋白进行电泳，后将蛋白电转移至聚偏氟 方差分析，事后检验采用图基检验。P＜0.05 为差
乙烯膜上。采用封闭液室温封闭蛋白膜1 h后置于 异有统计学意义。
一抗中4 ℃孵育过夜，置于二抗中37 ℃孵育1 h。使
2 结 果
用化学发光液检测Bax、Bcl⁃2、Parkin、β⁃actin蛋白表
达水平。 2.1 gAPN减轻IH所致H9C2细胞凋亡
1.2.7 Parkin siRNA转染 与 对 照 组（5.07 ± 0.25）% 和 gAPN 组（4.60 ±
Parkin siRNA 用于抑制 Parkin 基因表达。按照 0.76）% 相 比 ，IH 组 H9C2 细 胞 凋 亡 率［（27.90 ±
Lipofectamin2000 说明书，使用 Parkin siRNA、对照 1.90）%］明显升高；与 IH 组相比，IH+gAPN 组细胞
siRNA 转染 H9C2 心肌细胞。转染后，进行后续实 凋亡率［（17.77±1.85）%］下降（图1）；差异有统计学

验。Parkin siRNA 序列为 5′⁃CCAACUCCCUGAU⁃ 意义（P＜0.05，n=3）。对照组和 gAPN 组上述指标
UAAAGATT ⁃ 3′ 和 5′ ⁃ UCUUUAAUCAGGGAGUUG⁃ 差异无统计学意义（P＞0.05，n=3）。

对照组 gAPN组 IH组 IH+gAPN组
10 5 10 5 10 5 10 5
10 4 10 4 10 4 10 4
10 3 10 3 10 3 10 3
PI PI PI PI
10 2 10 2 10 2 10 2
10 1 10 1 10 1 10 1
10 0 10 0 10 0 10 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5
Annexin V Annexin V Annexin V Annexin V
图1 各组H9C2细胞凋亡
Figure 1 H9C2 cell apoptosis in each group

2.2 gAPN减轻IH所致H9C2细胞线粒体损伤 0.05，n=3）。
与对照组和 gAPN 组相比，IH 组 MMP 及 Bcl⁃2 2.4 Parkin siRNA 转染抑制 Parkin 表达后，线粒体
蛋白表达水平均下降；与 IH 组相比，IH+gAPN 组 自噬被下调
MMP及Bcl⁃2蛋白表达水平升高（图2）；差异均具有 与对照siRNA组相比，Parkin siRNA组Parkin蛋
统计学意义（P＜0.05，n=3）。与对照组和 gAPN 组 白表达水平明显下降（图 4）。与对照 siRNA 组及
相比，IH 组 Bax 蛋白表达水平升高；与 IH 组相比， Parkin siRNA组相比，IH+对照siRNA组线粒体自噬
IH+gAPN组Bax蛋白表达水平下降（图2），差异有统 小体、Parkin 蛋白表达水平升高；与 IH+对照 siRNA
计学意义（P＜0.05，n=3）。对照组和 gAPN 组上述 组相比，IH+gAPN+对照 siRNA 组线粒体自噬小体、
指标差异无统计学意义（P＞0.05，n=3）。 Parkin 蛋白表达水平升高；与 IH+对照 siRNA 组相

2.3 gAPN上调Parkin介导的线粒体自噬 比，IH+Parkin siRNA 组线粒体自噬小体、Parkin 蛋
与对照组和 gAPN 组相比，IH 组线粒体自噬小 白表达水平明显下降；与 IH+gAPN+对照 siRNA 组
体、Parkin 蛋白表达水平升高（图 3）；与 IH 组相比， 相比，IH+gAPN+Parkin siRNA 组线粒体自噬小体、
IH+gAPN 组线粒体自噬小体、Parkin 蛋白表达水平 Parkin 蛋白表达水平明显下降；差异均具有统计
明显升高；差异均具有统计学意义（P＜0.05，n=3）。 学意义（P＜0.05，n=3）。对照 siRNA 组和 Parkin
对照组和gAPN组上述指标差异无统计学意义（P＞ siRNA 组线粒体自噬小体差异无统计学意义（P＞