Page 88 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第2期
               ·234 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年2月


              管内，16 000 g 离心 1 min，弃上清后加入 980 μL 无              的40%甲酸待干燥后加入基质液，干燥的靶板使用
              菌去离子水和20 μL 0.5%的皂甙混匀后静置5 min，                    VITEK MS进行常规鉴定。
              16 000 g 离心 1 min，再次弃上清后加入 75%乙醇混                 1.2.4 结果判读
              匀，16 000 g离心2 min，弃上清，待乙醇挥发后加入                         通过 VITEK MS 的 MYLA 服务器进行结果判
              50 μL 70%的甲酸，震荡 10 min 后加入 50 μL 乙腈，              读，绿色表示鉴定可信度为60.0%~99.9%，只有1个
              继续震荡 10 min，最后 16 000 g 离心 1 min，取 1 μL           鉴定结果，记录鉴定结果；黄色表示表示鉴定可信
              上清液点样至金属靶板，干燥后加入基质液，干燥                            度为>60%，有2种或2种以上鉴定结果，分别记录鉴
              的靶板使用VITEK MS进行快速鉴定。                              定结果；红色表示鉴定可信度为<60%，无鉴定结果，
              1.2.2 分离胶沉淀法                                      鉴定失败，以分离出的单个菌落常规质谱鉴定结果
                  当血培养仪提示阳性报警时，取出阳性瓶进行                          为金标准。
              革兰染色，确保镜下有菌，颠倒混匀血培养瓶，用无                           1.3  统计学分析
              菌注射器抽取 4 mL 阳性血培养液至含分离胶的真                              使用 SPSS 22.0 软件进行统计学分析，计数资
              空采血管内，室温3 500 r/min离心10 min，弃上清后                  料以例数（百分比）［n（%）］表示。率的比较采用χ                     2
              加入1 mL无菌去离子水，小心混匀白色菌膜并转移                          检验进行分析，P < 0.05为差异有统计学意义。
              至 1.5 mL EP 管内，16 000 g 离心 1 min，弃上清及肉
                                                                2  结 果
              眼可见的血细胞杂质，加入75%乙醇混匀，16 000 g
              离心 2 min，弃上清，待乙醇挥发后加入 20 μL 无菌                    2.1 两种前处理方法鉴定单数菌感染标本结果比较
              去离子水混匀沉淀，取 0.5 μL 沉淀至金属靶板，革                            302 例阳性血培养标本经培养确认后，共有
              兰阴性菌直接加基质液，革兰阳性菌及真菌加入仪                            单数菌感染标本 288 例，使用分离胶⁃皂甙法联合
              器配套的40%甲酸待干燥后加入基质液，干燥的靶                           MALDI⁃TOF MS 直接鉴定血培养病原菌一般需要
              板使用VITEK MS进行快速鉴定。                                45 min，分离胶沉淀法一般需要 20 min。两种方法
              1.2.3 血培养阳性标本常规鉴定                                 联合 MALDI⁃TOF MS 直接鉴定需/厌氧瓶内病原菌
                  当血培养仪提示阳性报警时，取出阳性瓶进行                          结果见表 1，分别及同时使用两种方法鉴定需氧瓶
              革兰染色并转种至相应平板孵育18~24 h，分离出单                        内病原菌的准确率均高于厌氧瓶，但差异无统计学
              个菌落，挑取单个菌落，点样至金属靶板，革兰阴性                           意义（P > 0.05），不同类型培养瓶中两种方法鉴定的
              菌直接加基质液，革兰阳性菌及真菌加入仪器配套                            准确率差异也无统计学意义（P > 0.05）。

                             表1 分离胶-皂甙法与分离胶沉淀法直接鉴定需/厌氧瓶阳性病原菌结果准确率比较                                   ［n（%）］
                        方法                需氧瓶（n=236）           厌氧瓶（n=52）           合计（n=288）          P值
                   分离胶-皂甙法                  208（88.14）          42（80.77）          250（86.81）         0.155
                   分离胶沉淀法                   206（87.29）          44（84.62）          250（86.81）         0.606
                   同时使用两种方法                 216（91.53）          45（86.54）          261（90.63）         0.292
                   P值                         0.298               0.716               0.263


              2.1.1  两种前处理方法直接鉴定革兰阳性球菌结                         2.1.2  两种前处理方法直接鉴定革兰阴性杆菌结
              果比较                                               果比较
                  革兰阳性球菌中不同细菌直接鉴定结果见表                                革兰阴性杆菌中不同细菌的鉴定结果见表 3。
              2。直接鉴定革兰阳性球菌的准确率为同时使用两                            直接鉴定革兰阴性杆菌的准确率为联合两种方法=
              种方法>分离胶⁃皂甙法>分离胶沉淀法，三者准确率                          分离胶沉淀法>分离胶⁃皂甙法，三者准确率无统计
              无统计学差异（P > 0.05）。两种方法对葡萄球菌及                       学差异（P > 0.05）。两种前处理方法对革兰阴性杆
              肠球菌鉴定的准确率均显著高于链球菌及其他少                             菌鉴定的准确率均高于革兰阳性球菌，其中分离胶
              见革兰阳性球菌，差异有统计学意义（P < 0.05）。分                      沉淀法两者之间有显著差异（P=0.005）。分离胶⁃皂
              离胶⁃皂甙法在种水平未有鉴定错误的情况发生，分                           甙法中有 2 例阴沟/阿氏肠杆菌被鉴定错误为阴沟/
              离胶沉淀法有1例麻疹孪生球菌鉴定错误为溶血孪                            阿氏肠杆菌、霍氏肠杆菌混合感染。分离胶沉淀法
              生球菌。                                              中有1例阴沟/阿氏肠杆菌鉴定错误为霍氏肠杆菌，
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