Page 18 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第3期
·320 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年3月

A B C
kDa M LC组 PC组 4 4
PBS PBS
97 PC组多肽 PC组多肽
66 3 LC组多肽 * 3 LC组多肽
43 A549增殖倍率 2 * H1975增殖倍率 2 *
31 *
20 1 1
14 0 0
0 12 24 36 48 0 12 24 36 48
时间（h） 时间（h）
D
A549 H1975
BSA LC组多肽 PC组多肽 BSA LC组多肽 PC组多肽

1.4 * 1.6 *
1.2 1.4
细胞迁移率 0.8 * 细胞迁移率 1.0 *
1.2
1.0
0.8
0.6
0.6
0.4
0.2 0.4
0.2
0 0
LC组多肽
LC组多肽
BSA PC组多肽 BSA PC组多肽
A：3对癌和癌旁组织研磨上清提取蛋白进行SDS⁃PAGE胶处理后考马斯亮蓝染色；B、C：CCK⁃8实验评估肺腺癌和癌旁组织分泌多肽对肺
腺癌细胞A549（B）和H1975（C）增殖的影响，与对照组（PBS）比较，P ＜0.05（n=3）；C：Transwell实验评估肺腺癌和癌旁组织分泌多肽对肺腺癌
*
细胞迁移的影响，与对照组（BSA）比较，P ＜0.05（n=3）。
*
图1 肺腺癌和癌旁组织分泌多肽检测以及功能验证
Figure 1 Detection and functional verification of peptides secreted by lung adenocarcinoma and adjacent tissues
KEGG 通路富集分析（图 2E、F），此外，通过在线工 不稳定系数较高（>40），故在后续研究中将其剔除。
具对这些差异多肽前体蛋白绘制了蛋白互作网络 2.4 多肽 LACRP2 在 A549 和 H1975 细胞中的体外
图（图2G）。 功能实验
2.3 功能性差异多肽的筛选及其基本特征 将 通 过 化 学 合 成 得 到 的 多 肽 LACRP1、
用 Open Targets Platform 在线工具预测这些差 LACRP2、LACRP3、LACRP5、LACRP7，以 20、
异前体蛋白与肺癌之间的关系，在分析的 202 个前 50 μmol/L 的浓度加入到人肺腺癌细胞株 A549 和
体蛋白中，有79个蛋白可能与肺癌发生与发展存在 H1975 中进行生物学功能实验。划痕结果显示，在
关联。与这些前体蛋白对应的共有 101 条多肽，根 浓度为50 μmol/L时，仅有多肽LACRP2能同时抑制
据 LC⁃MS/MS 分析的结果，选取了其中组间差异较 A549 和 H1975 的迁移（图 3A）；然而 CCK⁃8 试验未
大（差异倍数≥3）、组内差异相对较小、质谱信号较 能证实 LACRP2 对 A549 和 H1975 增殖能力的抑制
高，同时在PC组高表达的7条多肽进行进一步的功 （图3B、C），Transwell 实验结果显示LACRP2能抑制
能研究。拟研究的这 7 条多肽的前体蛋白分别是： A549和H1975的侵袭能力（图3D）。这些结果证实
KAT6B、IQGAP1、ITGA2、BRD4、HSPA1A、VDR 和 多肽LACRP2具有体外抑制肺腺癌细胞株部分恶性
IGSF10。研究发现，这7种前体蛋白（或对应编码基 表型的功能。
因）都被明确报道与肺癌相关 ［15-21］ 。为了便于研究，
3 讨 论
将这7条多肽分别命名为LACRP1~7（lung adenocar⁃
cinoma related peptide1⁃7）。在此基础上，利用在线 近年来，由于存在低分子量、高灵敏度、低耐药
工具 ProtParam tool，对这 7 条多肽进行进一步的分 性和易于修饰等优点，肽类药物成为众多研究的
析（表 1），结果发现，LACRP4、LACRP6 这两条多肽 热点，多种抗肿瘤肽已上市并应用于患者的临床