Page 7 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第3期 南京医科大学学报（自然科学版）
2022年3月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·309 ·

·基础研究·

Zfp212基因敲除小鼠模型的建立和雌性生殖表型研究

白 雪，刘 露，胡 月，周 帅，霍 然 *
南京医科大学生殖医学国家重点实验室，组织胚胎学学系，江苏 南京 211166

［摘 要］ 目的：通过构建基因敲除小鼠模型探究锌指蛋白212（Zinc finger protein 212，Zfp212）对于雌性生育力的影响。方
法：利用CRISPR/Cas9技术构建Zfp212基因敲除小鼠；利用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫荧光实验检测Zfp212蛋白表
达、定位情况，并对Zfp212基因敲除效率进行验证；通过卵巢切片和HE染色、体外受精及早期胚胎培养和生育力测试实验对
Zfp212基因敲除雌性小鼠的生殖表型进行分析。结果：Zfp212基因在卵母细胞和早期胚胎中高表达，且呈母源表达模式；基因
敲除效率验证实验结果显示Zfp212敲除小鼠构建成功；Zfp212基因敲除雌性小鼠的卵泡发育、卵母细胞成熟、受精、植入前胚
胎发育以及平均每窝产仔数量与对照组小鼠相比，差异均无统计学意义。结论：Zfp212基因对雌性小鼠的生育力建立不是必
需的。
［关键词］ Zfp212；CRISPR/Cas9；基因敲除；雌性生育力
［中图分类号］ R339.2 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2022）03⁃309⁃08
doi：10.7655/NYDXBNS20220301

Construction of mice model of Zfp212 gene knockout and exploring its effects on female
fertility

BAI Xue，LIU Lu，HU Yue，ZHOU Shuai，HUO Ran *
State Key Laboratory of Reproductive Medicine，Department of Histology and Embryology，Nanjing Medical
University，Nanjing 211166，China

［Abstract］ Objective：The study aims to investigate the role of Zfp212 on female fertility by generating Zfp212 knockout mice
model. Methods：CRISPR/Cas9 system was used to generate Zfp212 knockout mice. Zfp212 expression pattern，subcellular location
and Zfp212 knockout efficiency were detected by quantitative real ⁃ time PCR（RT ⁃ qPCR），immunofluorescence staining（IF）and
Western blot. Ovary histological analysis and HE staining，in vitro fertilization（IVF），in vitro embryo culture and fertility test were
performed to explore the effects of Zfp212 knockout on female mice fertility. Results：Zfp212 was expressed dominantly in oocytes and
early embryos，and it showed a maternal expression pattern. The results of Western blot and sanger sequencing showed Zfp212
knockout mice model was constructed successfully. Compared with control groups，Zfp212 knockout female mice had no significant
differences in follicle development，oocyte maturation，fertilization，preimplantation embryo development and litter size. Conclusion：
These results indicated that Zfp212 gene is not necessary for the establishment of female fertility in mice.
［Key words］ Zfp212；CRISPR/Cas9；gene knockout；female fertility
［J Nanjing Med Univ，2022，42（03）：309⁃316］

生长阶段的卵母细胞胞质内细胞器大量复制， 了母源物质的积累 ［1-2］ 。随后的卵母细胞成熟、胚胎
RNA、蛋白质及能量物质大量积累，当卵母细胞生 基因组激活、早期胚胎发育和胚胎细胞谱系的建立
长至接近成熟卵子大小时，卵母细胞中的转录活动 均会受到这些积累的母源物质的调控 ［3-4］ 。近年来，
将降至非常低的水平甚至停止，此时卵母细胞完成 随着基因编辑技术的广泛应用，对于母源物质的认
识逐渐深入，一些关键母源因子的缺失或表达异常
［基金项目］ 国家重点研发计划项目（2018YFC1004002）；
国家自然科学基金（31871505） 会严重影响雌性生育能力及胚胎正常发育。比如，
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通信作者（Corresponding author），E⁃mail：huoran@njmu.edu.cn 小鼠卵母细胞中积累的 yes⁃相关蛋白（yes⁃associat⁃