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第42卷第6期            钱徐萍，张学会，孙鲁宁，等. 兰索拉唑诱导心肌细胞氧化应激损伤的机制研究［J］.
                  2022年6月                     南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（06）：802-808                       ·803 ·


                    兰索拉唑（lansoprazole，LPZ）是二代质子泵抑
                                                                  1  材料和方法
                制剂（proton pump inhibitor，PPI），主要通过抑制胃
                壁细胞的 H /K ⁃ATP 酶系统来阻断胃酸分泌，以达                      1.1  材料
                             +
                          +
                到抑酸的效果 。临床广泛用于胃溃疡、十二指肠                            1.1.1 细胞株
                            ［1］
                溃疡、反流性食管炎以及卓⁃艾综合征的治疗，也可                               H9C2（大鼠心肌细胞），购于中国科学院分子细
                与其他药物联合用于治疗幽门螺旋杆菌感染。随                             胞科学卓越创新中心。
                着LPZ在临床的广泛应用，特别是长期使用，其潜在                          1.1.2 药品与试剂

                的不良反应逐渐引起研究者的关注。短期使用LPZ                               兰索拉唑标准品（纯度99.6%，中国食品药品检
                常见的不良反应主要包括腹痛、便秘、腹泻、恶心、                           定研究院）；DMEM培养基、胎牛血清、Trypsin⁃EDTA
                头晕或头痛等。长期或大剂量使用LPZ可能会导致                           消化液（Biological Industries 公司，以色列）；二甲基
                骨质疏松、感染、肾脏损伤、维生素B12等微量元素缺                         亚 砜（dimethyl sulphoxide，DMSO）（Sigma 公 司 ，美
                乏，并增加心血管事件的发生风险                ［2-3］ 。研究表明，       国）；GAPDH 抗体、GRP78 抗体、细胞色素 C（cyto⁃
                                                ［4］
                长期大剂量使用PPI可导致心动过快 ，也有调查报                          chrome C，Cyt C）抗体、HRP标记山羊抗兔IgG（武汉
                告显示，163例PPI所致严重不良反应中，心血管系统                        塞维尔生物科技有限公司）；B细胞淋巴瘤/白血病2
                                      ［5］
                不良反应有7例，占4.29% 。心血管事件主要包括                        （B⁃cell lymphoma/leukemia 2，Bcl⁃2）抗体（Abcam 公
                心肌梗死、心力衰竭等，而心肌梗死的发生与细胞                            司，英国）；Cleaved⁃Caspase⁃12 抗体、CHOP 抗体、
                内钙超载、活性氧增加、心肌细胞凋亡和线粒体破                            Cleaved⁃Caspase⁃3抗体（CST公司，美国）；Bcl⁃2相关
                坏等特定途径有关        ［6-7］ 。                           X蛋白（Bcl⁃2⁃associated X protein，Bax）抗体（Protein⁃
                    活性氧（reactive oxygen species，ROS）是一种           tech 公司，美国）；β⁃actin 抗体（Affinity 公司，美国）；
                引起氧化应激的过氧化物，可通过损伤细胞膜脂                             N⁃乙酰⁃L⁃半胱氨酸（N⁃acetyl⁃L⁃cysteine，NAC）、
                质及脱氧核糖核酸（deoxyribo nucleic acid，DNA）              PMSF、RIPA 裂解液（杭州碧云天生物技术有限公
                等机制损伤细胞 。ROS 已被证实可以引发内质                           司）。
                               ［8］
                网应激，从而参与细胞凋亡过程                ［9］ 。内质网应激          1.1.3 主要仪器
                是一种新的凋亡途径，参与各种状态下的细胞凋                                 CO2培养箱 HF100（上海力申科学仪器有限公
                亡。当内质网处于应激状态时，内质网的分子伴                             司），离心机（Eppendorf 公司，美国），倒置荧光显微
                侣如葡萄糖调节蛋白 78（glucose⁃regulated protein            镜 IX73（Olympus 公司，日本），电泳仪 PowerPac           TM
                78，GRP78）会相应增加，GRP78 是内质网应激反                      BASIC（Bio⁃Rad 公司，美国），超声破碎仪（Sonics 公
                应的标志蛋白，与错误折叠的蛋白或未折叠的蛋                             司 ，美 国），化学发光图像分析系统（Tanon 5200
                白相结合，使细胞进入降解途径                ［10］ 。内质网应激         Multi，上海天能科技有限公司），流式细胞分析仪
                诱导的下游凋亡信号通路包括 CCAAT/增强子结                         （Beckman Coulter公司，美国）。
                合蛋白同源蛋白或生长停滞及 DNA 损伤诱导基                           1.2  方法
                因 153（CHOP/GADD153）、c ⁃ Jun 氨 基 末 端 激 酶           1.2.1 细胞培养及分组
               （JNK）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cyste⁃                            H9C2 贴壁生长，正常培养阶段使用含 1%双抗
                inyl aspartate⁃specific proteinase，Caspase）通路。内   和10%胎牛血清的DMEM 培养基进行培养，隔天换

                环境处于稳态时，C/EBP 同源蛋白（C/EBP⁃homolo⁃                  液。细胞给药阶段用含有 0.1% DMSO、1%双抗和
                gous protein，CHOP）和 Caspase⁃12 的表达很弱，当            10%胎牛血清的培养基或相应的含药培养基进行培

                稳态失衡时，细胞发生内质网应激，CHOP 和 Cas⁃                       养，每天换液。细胞于37 ℃、含有5% CO2的培养箱
                pase⁃12 的表达明显升高，过度表达的 CHOP 和                      中培养，当细胞密度长至 80%左右时进行传代，传
                Caspase⁃12 会促使细胞周期停滞甚至导致细胞凋                       代比例为 1∶3，取状态良好的对数生长期细胞进行
                亡 ［10］ 。凋亡被认为是心肌损伤的重要潜在机制                         实验。
                之一。因此，本研究以心肌细胞中 ROS 为基础，                              第一阶段实验分为0 h组、12 h组、24 h组和48 h
                运用 Western blot、荧光显微等技术，探究 LPZ 增加                 组，各组细胞间 DMSO 含量、培养时间保持一致，
                心血管风险的可能机制，为临床安全用药提供一                             LPZ 浓度为 10 μmol/L。第二阶段实验分为 Con 组、
                定参考。                                              LPZ 组、NAC 组、LPZ+NAC 组共 4 组。Con 组为对
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