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第42卷第6期 耿 蓉,罗 岩,孙 翠,等. 小鼠不同脂肪组织对冷应激的适应性反应[J].
2022年6月 南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(06):809-814 ·811 ·
数据用均数±标准差(x ± s)进行描述,两组定量数 激组小鼠体重、血糖、食物余量;冷刺激 70 h 后,安
据比较采用双尾 t 检验,P < 0.05 为差异有统计学 乐死小鼠,分别取肩胛区 BAT、腹股沟区 iWAT、附
意义。 睾eWAT。
冷刺激 48 h,对照组和冷刺激组体重(图 1B)、
2 结 果
脂肪组织及肝脏重量(图 1C)无显著差异。冷刺激
2.1 冷刺激增加进食量,对体重及脂肪组织重量影 组小鼠进食量显著增加(P=0.006 8,n=5,图 1D),这
响不显著 与其他文献报道结果一致 [14] 。观察各脂肪组织切
C57BL/6J 小鼠冷刺激实验设计如图 1A 所示, 片的 HE 染色结果,发现与对照组相比,冷刺激组
小鼠适应性喂养24 h后,分别记录对照组和冷刺激 BAT 中细胞大小及胞内脂滴无明显变化,iWAT 组
组小鼠体重、血糖、原始食物量,冷刺激组小鼠6 ℃、 织内呈现褐色化改变,eWAT 内脂肪细胞体积略减
单笼单只饲养;冷刺激 48 h 后,记录对照组和冷刺 少(图1E),说明冷刺激显著诱导iWAT褐色化。
A B C
单笼饲养 测体重、血糖 测体重、血糖 小鼠 40 对照组(n=5) 2.0 对照组(n=5)
适应阶段 记录进食量 进食量、体温 安乐死 冷刺激组(n=5) 冷刺激组(n=5)
30 1.5
22 ℃ 6 ℃ ( g )
-24 h 0 h 48 h 70 h ( g ) 20 1.0
体重 组织重量
10 0.5
0 0
0 h 48 h BAT iWAT eWAT 肝脏
D E
10 对照组(n=5) BAT iWAT eWAT
h ) 8 冷刺激组(n=5)
*
( g/24 6
进食量 4 2 对照组
0
冷刺激组
A:动物实验设计;B:体重变化;C:不同脂肪组织及肝脏重量变化;D:进食量变化,两组比较,P < 0.05;E:各脂肪组织HE染色(400×)。
*
图1 冷刺激后小鼠体重及脂肪组织的变化
Figure 1 Changes of body weight and adipose tissues in mice after cold stimulation
2.2 冷刺激后3种脂肪组织产热基因表达有所不同 关基因和肉碱棕榈酰转移酶 1A(carnitine palmitoyl⁃
为了明确冷刺激对不同脂肪组织产热及线粒 transferase 1A,Cpt1a)、肉碱棕榈酰转移酶 2(carni⁃
体功能是否存在不同,对不同脂肪组织进行了Ucp⁃1 tine palmitoyltransferase 2,Cpt2)等脂肪酸氧化相关
的免疫组化染色(图2A)。发现在BAT和eWAT中, 基因的表达显著高于对照组(图2B),而对照组和冷
对照组和冷刺激组 Ucp⁃1 无显著差异;而在 iWAT 刺激组Ucp⁃1的mRNA和蛋白水平差异均无统计学
中,冷刺激组 Ucp⁃1 表达显著高于对照组。通过 意义(图2B、C),考虑在3种脂肪组织中,BAT中Ucp
qRT⁃PCR和Western blot检测了BAT、iWAT和eWAT ⁃1 表达最高,冷刺激不能引起其进一步升高。在
中不同基因mRNA和蛋白表达水平:在BAT中,qRT⁃ iWAT 中 ,qRT ⁃ PCR 结 果 显 示 冷 刺 激 组 Ucp ⁃ 1、
PCR结果显示冷刺激组中Ppargc1α、Cidea、肿瘤坏死 Ppargc1α、Cidea 等褐色化相关基因和乌头酸酶 2
因子受体超家族成员9(tumor necrosis factor receptor (aconitase 2,Aco2)等线粒体功能相关基因的表达
superfamily member 9,TNFRSF9/CD137)等褐色化相 显著高于对照组(图2D);Western blot结果显示冷刺