Page 7 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第6期 南京医科大学学报（自然科学版）
2022年6月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·759 ·

·基础研究·

USP14调控OSBPL2蛋白去泛素化作用的实验研究

张洪都，王红顺，王天明，姚 俊，曹 新 *
南京医科大学医学遗传学系，江苏 南京 211166

［摘 要］ 目的：研究泛素特异性蛋白酶14（ubiquitin⁃specific peptidase 14，USP14）通过调控氧化固醇结合样蛋白2（oxysterol
binding protein⁃like 2，OSBPL2）的泛素化水平稳定OSBPL2表达的分子机制。方法：以HeLa细胞为工具细胞，通过对USP14过
表达、敲降以及活性抑制，检测OSBPL2的表达水平；采用体外过表达实验考察USP14对OSBPL2的泛素信号和泛素化水平的
调控；采用免疫共沉淀（co⁃immunoprecipitation，Co⁃IP）阐明USP14与OSBPL2相互作用的具体结构域、不同结构域在蛋白相互
作用中的作用以及OSBPL2的关键泛素化位点。结果：USP14与OSBPL2存在相互作用关系并稳定OSBPL2的表达而不改变其
转录水平；体外过表达和Co⁃IP实验结果表明，USP14催化（catalytic，CAT）结构域与OSBPL2氧固醇结合蛋白相关结构域（OSBP
⁃related domain，ORD）的相互作用降低OSBPL2的泛素化水平；类泛素（ubiquitin⁃like，UBL）结构域在USP14与OSBPL2相互作
用中起到了促进作用；Lys209和Lys361是OSBPL2泛素化和去泛素化的关键位点。结论：USP14通过调控OSBPL2蛋白Lys209
和Lys361两个位点的泛素化进而调控其泛素化水平，稳定OSBPL2蛋白的表达。
［关键词］ 氧化固醇结合蛋白样蛋白2；泛素特异性蛋白酶14；泛素化；去泛素化
［中图分类号］ R393 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2022）06⁃759⁃09
doi：10.7655/NYDXBNS20220601

Experimental study on USP14 regulating the deubiquitination of OSBPL2 protein

ZHANG Hongdu，WANG Hongshun，WANG Tianming，YAO Jun，CAO Xin *
Department of Medical Genetics，Nanjing Medical University，Nanjing 211166，China

［Abstract］ Objective：This study aims to explore the molecular mechanism of ubiquitin⁃specific peptidase 14（USP14）instabilizing
oxysterol binding protein⁃like 2（OSBPL2）expression by regulating the ubiquitination level of OSBPL2. Methods：HeLa cells was used
as tool cells to detect the expression of OSBPL2 by overexpression，knockdown and activity inhibition of USP14. The regulation of
USP14 on ubiquitin signal and ubiquitination level of OSBPL2 was investigated in vitro. The specific domain of USP14 interacting with
OSBPL2，the interactional role of different domains and the key ubiquitination sites of OSBPL2 were determined by Co ⁃
immunoprecipitation（Co⁃IP）. Results：USP14 interacted with OSBPL2 and stabilized the expression of OSBPL2 without changing its
transcriptional level. In vitro ubiquitination experiment and Co⁃IP showed that the catalytic（CAT）domain of USP14 interacted with the
OSBP ⁃ related domain（ORD）of OSBPL2，which reduced the ubiquitination level of OSBPL2. The ubiquitin ⁃ like（UBL）domain of
USP14 could promote the interaction between USP14 and OSBPL2. In addition，Lys209 and Lys361 could be the key sites for OSBPL2
ubiquitination and deubiquitination. Conclusion：USP14 modulated the ubiquitination level of OSBPL2 by regulating the
ubiquitination of Lys209 and Lys361 and further stabilized OSBPL2 expression.
［Key words］ oxysterol binding protein⁃like 2；ubiquitin⁃specific peptidase 14；ubiquitination；deubiquitination
［J Nanjing Med Univ，2022，42（06）：759⁃767］

氧化固醇结合蛋白（oxysterol binding protein， protein，ORP）是一类与脂质代谢相关的蛋白，进化

OSBP）和氧化固醇结合蛋白样蛋白（OSBP⁃related 上高度保守，在大多数真核生物中广泛表达。人类
ORP家族中包含12个成员，它们参与了囊泡运输、脂

［基金项目］ 国家自然科学基金（81771000，82071052） 质代谢、信号转导和泛素化修饰等生物过程 ［1-3］ 。氧
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通信作者（Corresponding author），E⁃mail：caoxin@njmu.edu.cn 化固醇结合蛋白样蛋白 2（oxsterol binding protein⁃