Page 79 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第6期 梁志钢，任丹丹，程 霞，等. 基于碳点的比率荧光探针用于检测6⁃硫鸟嘌呤［J］.
2022年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（06）：830-836 ·831 ·

药物，服用剂量过少起不到治疗作用，而服用较高 1.2 方法
剂量则存在潜在不良反应，尤其会引起骨髓抑制 1.2.1 CD的合成
和肝损伤 ［3-5］ ，因此对该药物片剂进行质量控制尤 通过简易水热法制备得到CD ［14］ 。将600 μL的
为重要。 二亚乙基三胺和 1.2 g 柠檬酸单水合物溶于 20 mL
目前，用于检测 6⁃TG 的方法有多种，包括比色 超纯水中。将上述混合溶液转移至30 mL聚四氟乙
［6］
［8］
法 、高效液相色谱串联质谱法 、伏安法 、表面增 烯内衬的不锈钢高压釜中，于200 ℃加热4 h。冷却
［7］
强拉曼散射 以及荧光分光光度法 ［10-13］ 等。其中基 至室温后，用旋转蒸发仪浓缩得到棕色溶液。将得
［9］
于荧光纳米材料的荧光传感器因其固有的灵敏度、 到的糊状物用丙酮离心洗涤 3 次。真空干燥过夜
简单性和快速性而极具吸引力 ［11］ 。但到目前为止， 后，将黄色产物溶于超纯水中备用，得到的CD溶液
通过使用荧光纳米材料对6⁃TG的检测报道比较少， 的浓度为2.3 μg/L。置于4 ℃冰箱中避光备用。
且都局限于单发射荧光探针。 1.2.2 实验条件的优化

本研究合成了发射蓝色荧光的碳点（carbon 为了考察不同实验条件对实验结果的影响，本
dot，CD） ［14］ ，并 将 其 与 邻 苯 二 胺（o ⁃ phenylenedi⁃ 研究依次对反应体系的 pH、Cu 与 OPD 反应时间、
2+
amine，OPD）一起用于构建定量检测6⁃TG的新型比 体系中 Cu 的终浓度、Cu 与 6⁃TG 反应时间、CD 加
2+
2+
率荧光探针。 入后反应时间进行了优化。
1.2.3 选择性实验
1 材料和方法
配制浓度为 50 mmol/L 的常见离子及其他物质
2⁃
⁃
⁃
2⁃
+
2+
+
1.1 材料 的标准溶液（Na 、K 、Mg 、NO3 、Cl 、SO4 、CO3 、尿
氢氧化钠、6⁃TG、硝酸钠、还原型谷胱甘肽、L⁃半 素、葡萄糖、胞嘧啶、尿嘧啶、抗坏血酸）和浓度为
胱氨酸、胞嘧啶（上海阿拉丁试剂有限公司）；硫酸 1 mmol/L的生物体内常见干扰物质溶液（半胱氨酸、
铜五水合物（上海生工生物工程股份有限公司）；三 谷胱甘肽），分别吸取 20 μL 上述干扰物质与 50 μL
（羟甲基）氨基甲烷（Tris（hydroxymethyl）aminometh⁃ 400 μmol/L硫酸铜溶液混匀，平行配制3份，放置于
ane，Tris）、OPD、氯化钡二水合物、氯化镁六水合物、 37 ℃摇床中孵育10 min。接着加入10 μL OPD溶液
滑石粉、羟丙基甲基纤维素（上海麦克林生化科技 （40 mmol/L）于37 ℃摇床中反应60 min。取出后，分
有限公司）；葡萄糖、尿嘧啶、抗坏血酸、可溶性淀粉 别加入10 μL CD溶液，室温下放置5 min，测定荧光
（国药集团化学试剂有限公司）；氯化钾、尿素、无水 强度，计算碳点在 450 nm 处与 DAP 在 560 nm 处的
三氯化铁（西陇化工股份有限公司）；无水碳酸钠 荧光强度比值F450/F560。此外，分别配制模拟药片辅
（上海虹光化工厂有限公司）；硫酸镁（无锡民丰试 料的溶液，按照上述步骤进行选择性考察，比较不同
剂有限公司）；硝酸铝（上海新宝精细化工厂）；氯化 干扰物质是否会对体系的荧光产生影响。
锰（上海实验试剂有限公司）；柠檬酸单水合物、二 1.2.4 6⁃TG传感平台的方法学验证
亚乙基三胺（上海西格玛奥德里齐贸易有限公司）； 标准曲线的绘制：配制浓度为 400 μmol/L 的
超纯水（Synergy超纯水装置）。 6⁃TG标准溶液，分别取上述标准溶液10、20、40、50、
HITACHI F⁃7100 荧光分光光度计（深圳日立高 60、70、80、85 μL 与 50 μL 400 μmol/L 的硫酸铜溶
新技术公司）；KQ5200E 型超声波清洗器（昆山超声 液、20 μL 的 Tris⁃HCl 缓冲液（0.2 mol/L，pH 7.0），再
仪器有限公司）；ZQLY⁃180F 振荡培养箱（上海知楚 加入不同体积超纯水，使得离心管中溶液总体积为
仪器有限公司）；XW⁃80A 微型漩涡混合仪（上海沪 180 μL，用涡旋仪混合均匀，平行配制 3 份，反应
西分析仪器厂有限公司）；AUW220D 十万分之一天 10 min。接着加入 10 μL OPD 溶液（40 mmol/L）于
平（岛津公司，日本）；梅特勒⁃托利多 FE20 pH计（上 37 ℃摇床中反应 60 min。取出后，分别加入 10 μL

海梅特勒⁃托利多仪器有限公司）；超纯水装置（Syn⁃ CD 溶液，室温下放置 5 min，测定荧光强度，根据
ergy超纯水装置）。 6⁃TG浓度对检测平台的荧光强度比值绘制标准曲线。
6⁃TG 溶液配制方法：称取 10.0 mg 的 6⁃TG 于 验证：通过测定制备的模拟药片，对本方法的
10 mL 离心管，加入5 mL 0.766 mg/mL的NaOH溶液， 回收率、精密度进行了检验。该6⁃TG模拟药片每片
超声使之溶解。取50.0 μL上述溶液于4 mL离心管 重 1.000 0 g，其中 6⁃TG 的规格为 25.0 mg，并加入了
中，再加入1.445 mL的水使之终浓度为0.4 mmol/L。 4.6 mg 羟丙甲基纤维素（hydroxypropyl methyl cellu⁃