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第42卷第7期        祁颜艳，顾 愹，杨       涛. 负载HIP的耐受性树突状细胞对BDC2.5 T细胞的免疫调节作用［J］.
                  2022年7月                     南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（7）：913-920                        ·917 ·


                2.2  负 载 2.5HIP 的 tolDC 及 LPS ⁃ tolDC 可 抑 制       可行的   ［17］ ；但也有临床前研究发现负载 GAD65 的
                BDC2.5 T细胞的增殖和活化                                  tolDC降低了tolDC对T1DM的保护作用            ［18］ 。而新生
                    将培养了 8 d 并负载 2.5HIP 或无关肽的 iDC、                表位在 T1DM 发病机制中可能起重要作用，研究负
                tolDC、LPS⁃tolDC、LPS⁃iDC 分别与BDC2.5 CD4 T细          载新生表位的 tolDC 也许会为抗原特异性 tolDC 疗
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                胞进行共培养，72 h 后检测 T 细胞的增殖、活化情                       法打开新思路。所以本研究的创新之处在于首次
                况。结果发现 2.5HIP⁃tolDC 组［（37.40±5.18）%］以             针对新生表位 2.5HIP，探究抗原特异性 tolDC 细胞
                及2.5HIP⁃LPS⁃tolDC组［（49.23±4.85）%］的T细胞增            疗法对致糖尿病性BDC2.5 T细胞的免疫调节作用。

                殖率与 2.5HIP⁃iDC 组［（71.53±7.56）%］及 2.5HIP⁃              已有多个研究为 tolDC 的体外诱导提供了参
                LPS⁃iDC 组［（84.03±4.88）%］相比明显下降（P <                考，GM⁃CSF 及 IL⁃4 可诱导人外周血单核细胞来源
                0.001，图 3A）。2.5HIP⁃tolDC 组［（19.57±2.67）%］以        或小鼠骨髓祖细胞来源的 iDC 的生成，同时加入药
                及2.5HIP⁃LPS⁃tolDC组CD44 CD69 活化T细胞的比               物（如地塞米松、雷帕霉素、VitD3等）或免疫调节剂
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                例［（49.37 ± 4.84）%］与 2.5HIP ⁃ iDC 组［（81.67 ±      （IL⁃10、TGF⁃β等）可产生 tolDC          。tolDC 的特征
                4.23）%］以及2.5HIP⁃LPS⁃iDC组［（83.90±2.42）%］相          是其半成熟（semi⁃mature）的表型，低表达 CD80、
                比也明显降低（P < 0.001，图3B）。负载无关肽的4组                    CD86、CD40和MHC等分子，高表达PD⁃L1等共抑制
                DC 均与 T 细胞无反应，组间无差异性，因为共培养                        分子，分泌低水平的抗炎细胞因子、高水平的免疫
                所用的BDC2.5 T细胞是2.5HIP特异性的T细胞。                      抑制细胞因子，tolDC通过这些机制使得T细胞克隆
                2.3  负载2.5HIP的tolDC可诱导更高比例的Treg细                  失能、凋亡。iDC虽然也低表达共刺激分子，但其未
                胞产生                                               成熟状态是不稳定的，在体内治疗或者炎症情况下
                    tolDC 诱导免疫耐受的机制之一是诱导 Treg 的                   可能被激活，所以 tolDC 的稳定性也是保证其诱导
                产生  ［11］ ，本研究进一步检测了与各组 DC 共培养的                    免疫耐受的一个重要方面。本研究用维生素 D3 诱
                T 细胞中 Treg（CD4 CD25 Foxp3 ）的比例。结果发                导出的 tolDC 低表达 CD80、CD86，高表达 PD⁃L1，在
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                现，2.5HIP⁃tolDC 组可以诱导最高比例的 Treg 细胞                 LPS 刺激后仍能保持稳定的半成熟耐受表型，且炎
                产 生［（10.77 ± 0.82）%］，与 2.5HIP ⁃ iDC［（5.62 ±       性细胞因子IL⁃12p70分泌减少，免疫抑制细胞因子
                1.73）%］及 2.5HIP⁃LPS⁃iDC 组［（4.11±0.52）%］相比         TGF⁃β分泌增多。tolDC 的 MHCⅡ分子表达低于
                差异显著（P < 0.001，图4）。但2.5HIP⁃LPS⁃tolDC组             iDC，虽然两者没有统计学差异，但在LPS刺激后，两
                的 Treg 比例［（6.05±1.27）%］与 2.5HIP⁃LPS⁃iDC 组         者的 MHCⅡ分子表达有显著差异，tolDC 这种在外
               ［（4.11±0.52）%］相比差异并无统计学意义。负载无                      来危险信号或炎症刺激下仍保持表型稳定性也是
                关肽的各组DC几乎不诱导产生Treg且组间差异无                          其耐受性的一种表现。
                统计学意义。                                                研究提示在 tolDC 体内治疗前用 LPS 进行刺激
                                                                  十分必要    ［20］ ，LPS 刺激是其获得迁移活性和增强抗
                3 讨    论
                                                                  原提呈所必需的，且不会降低其耐受功能。本研究
                    T1DM 作为一种自身免疫疾病，使用外源性胰                        结果也证实了这一点，尽管 LPS⁃tolDC 诱导抗原特
                岛素进行治疗并不能阻止胰岛自身免疫的发展，而                            异性Treg产生的能力并不如tolDC 显著，但tolDC 和
                                                                                                           +
                通过诱导自身抗原免疫耐受有望治愈T1DM。tolDC                        LPS⁃tolDC均可以显著抑制致病性BDC2.5 CD4 T细
                细胞疗法作为一种极具潜力的诱导免疫耐受方法                             胞的增殖和活化。所以 LPS 刺激后的 tolDC 不仅可
                受到了人们的关注，但目前大多数基于 tolDC 的治                        以保持稳定的耐受表型，而且也维持了其抑制 T 细
                疗都是非抗原特异性的。负载抗原的tolDC 疗法可                         胞增殖活化的能力，其是否具有更好的迁移能力还
                以避免广泛的免疫抑制并有望诱导抗原特异性免                             需要进一步的体内实验进行验证。需要作出解释
                疫耐受，但其效果是否更佳尚没有定论。研究表明                            的是，本研究结果显示 iDC 刺激 T 细胞增殖及活化
                负载胰岛素原的tolDC 在体外可以诱导具有各种表                         的能力接近LPS⁃iDC，这是由于iDC的耐受表型的不
                型的抗原特异性 Treg，表达调节标志物如 Lag⁃3、                      稳定性   ［11］ ，在吞噬抗原后可以获得更活跃的表型和
                CD161，并有效抑制效应 CD8 和 CD4 T 细胞            ［16］ ，且   迁移能力，从而刺激了T细胞的增殖和活化 。
                                                                                                        ［21］
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                一项对 T1DM 患者皮内注射负载胰岛素原肽 tolDC                          综上所述，本研究发现负载HIP的tolDC可以通
                的临床研究显示负载抗原的tolDC 疗法似乎是安全                         过其稳定的耐受表型和功能来抑制 BDC2.5 T 细胞
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