Page 40 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第7期
·936 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年7月

A 正常饮食8周 多西环素饮食8周

CK

CK/ALCAT KO

B 正常饮食12周 多西环素饮食12周

CK

CK/ALCAT KO

A：多西环素饮食8周时通过micro⁃CT检测小鼠肺部肿瘤；B：多西环素饮食12周时通过micro⁃CT检测小鼠肺部肿瘤。H：心脏，L：肺，S：脊
髓，T：肿瘤，红色圆圈部位是肺占位肿瘤，micro⁃CT的分辨特征：密度越高颜色越浅。
图2 micro⁃CT检测小鼠的肺部肿瘤
Figure 2 micro⁃CT detected lung tumors in mice

肺的侵蚀程度更高（图3A）。对肺重/体重进行相对 2.5 抑制ALCAT1通过阻止ROS产生抑制HIF1α表
定量分析，发现多西环素饮食组中 CK 小鼠肺重/体 达，减少糖酵解代谢，影响Akt磷酸化水平
重值明显高于 CK/ALCAT1 KO 小鼠和正常饮食组 为了进一步研究 ALCAT1 在 KRAS 突变的肺腺
小鼠（图 3B）。TTF1 是肺腺癌标志物，RT⁃PCR 检 癌中的作用机制，本研究利用 CoCl2 （200 μmol/L）处
测结果显示，与正常饮食组相比，多西环素饮食 理KRAS突变的人肺腺癌细胞系（A549）诱导缺氧微
组 TTF1 的表达明显升高，提示肺腺癌的存在，而 环境激活 HIF1α，并联合 ALCAT1 抑制剂（Jenu）药
ALCAT1 缺失降低 TTF1 的表达（图 3C）。HE 染色 理学抑制ALCAT1。通过Western blot 检测Akt磷酸
结果显示，正常饮食组的小鼠肺部可见结构清晰 化水平，结果显示，在缺氧条件下Akt磷酸化水平明
的肺泡，多西环素饮食组中 CK 小鼠出现多个大 显升高，Akt磷酸化水平随Jenu浓度增加表达下降，
的固体型腺癌灶，肺部结构被侵占，CK/ALCAT1 KO Jenu（10 μmol/L）抑制效果显著（图 5A、B）。与未缺
小鼠减少局灶性增生，癌灶体积缩小（图3D）。以上 氧处理的对照组相比，缺氧处理后 ROS 水平增加，
结果提示ALCAT1的缺失减缓KRAS 诱导的肺腺癌 Jenu 抑制 ALCAT1 在缺氧/未缺氧条件下都显著降
的发展。 低 A549 细胞中的 ROS 水平（图 5C）。此外与对照
2.4 ALCAT1缺失降低Akt磷酸化水平 组相比，缺氧增加糖酵解产物乳酸生成，Jenu 抑制
为了进一步研究 ALCAT1 缺失是否通过影响 ALCAT1 显著降低乳酸的生成量（图 5D）。在 A549
KRAS 基因相关通路延缓肺腺癌的发展，本研究通 细胞中使用线粒体抗氧化剂（Mito Q）抑制线粒体
过Western blot检测Akt、Erk1/2蛋白的磷酸化水平， ROS 的产生，Western blot 检测结果显示缺氧诱导
结果显示在多西环素饮食组中，与 CK 小鼠相比， HIF1α激活，Mito Q（5 μmol/L）抑制ROS的产生，显著
ALCAT1 缺失降低 Akt 磷酸化水平（图 4A），灰度分 降低 HIF1α的表达，同时发现 Jenu（3 μmol/L）处理
析发现 CK/ALCAT1 KO 小鼠中 p⁃Akt（T308）/Akt 比 条件下 HIF1α的表达降低不明显，Jenu（10 μmol/L）
值下降（图 4B），但 CK 小鼠与 CK/ALCAT1 KO 小鼠 显著降低 HIF1α的表达（图 5E、F）。上述结果证明
之间p⁃Erk1/2/Erk1/2比值差异不明显（图4C）。 在缺氧条件下抑制ALCAT1通过阻止ROS产生抑制