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第42卷第7期 张潇月，郑 月，蒋 厅，等. ALCAT1缺失在KRAS诱导肺腺癌中的作用及机制研究［J］.
2022年7月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（7）：932-940，972 ·935 ·
得到实验组 CC10rtta⁃KRAS/ALCAT KO（以下简称 实 CC10rtta⁃KRAS 基 因 双 转 入 并 且 ALCAT1 敲
CK/ALCAT1 KO）转 基 因 小 鼠 ，对 照 组 CC10rtta ⁃ 除，CC10rtta⁃KRAS/ALCAT1 KO 小鼠模型构建成功
KRAS（以下简称 CK）小鼠（图 1A）。同时对各组小 （图1B）。本研究选取8周龄的小鼠，分别在多西环
鼠进行基因型鉴定，对于CK小鼠，检测的是敲入的 素饮食8周、12周时，通过micro⁃CT检测小鼠肺部的
CC10rtta⁃KRAS 基因，当小鼠表达该基因时，PCR 可 肿瘤发生情况，并在12周实验终点解剖取小鼠肺组
以检测出 CC10rtta⁃KRAS 条带，反之该基因未导入 织观察肺腺癌的发展（图 1C）。从小鼠 8 周龄开始
到小鼠体内；对于 ALCAT1 KO 小鼠，引物 ALCAT1 记录体重，即多西环素饮食诱导的 0~12 周，发现正
检 测 小 鼠 是 否 表 达 ALCAT1 基 因 ，引 物 NEO 检 常饮食组体重无显著差异，CK小鼠从多西环素饮食
测小鼠 ALCAT1 基因是否被成功敲除。结果证 第5周开始，体重增长显著减慢（图1D）。
A ALCAT1 KO B M 1 2 3 4 5 6 7
KRAS 400 bp
CC10rtta⁃KRAS/ALCAT1杂合
CC10rtta 500 bp
CC10rtta⁃KRAS/ALCAT1 KO
CC10rtta⁃KRAS
NEO 500 bp
CC10rtta⁃KRAS/ALCAT1杂合
ALCAT1 649 bp
正常饮食CK（n=3）
●
C 正常饮食 D ▲ 正常饮食CK/ALCAT1 KO（n=3）
35 ■ 多西环素饮食CK（n=6）
多西环素饮食CK/ALCAT1 KO（n=6）
CT CT
▲
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30 ● ▲ ● ▲ ▲
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0周 8周 12周 （ g ） ▲ ● ▲ ● ● ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ *
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多西环素饮食
体重 25 ▲ ▲ ● ▲ ▲ ▲ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■
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CT CT ▲
20
0周 8周 12周 0 2 4 6 8 10 12
药物诱导时间 药物诱导时间（周）
A：CC10rtta⁃KRAS/ALCAT1 KO小鼠的构建；B：通过PCR技术，检测CK/ALCAT1 KO小鼠与CK小鼠的基因型，M：DNA分子量标记，1、2、5
为CK/ALCAT1 KO小鼠，6、7为CK小鼠，3、4为CK/ALCAT1杂合小鼠；C：小鼠治疗时间轴；D：8周龄小鼠多西环素饮食0~12周的体重与正常
饮食小鼠体重。两组比较，P < 0.05。
*
图1 CC10rtta⁃KRAS/ALCAT1 KO小鼠肺癌模型的构建
Figure 1 Constructed lung cancer model of CC10rtta⁃KRAS/ALCAT1 KO mice
2.2 micro⁃CT检测小鼠的肺部肿瘤 环素饮食12周时，CK组中观察到100%肺部肿瘤的
多西环素饮食驱动 KRAS 的表达诱导肺腺癌， 发生，但肿瘤体积存在差异；CK /ALCAT1 KO 小鼠
在多西环素饮食 8 周时通过 micro⁃CT 扫描小鼠胸 的肺部肿瘤体积相对较小，且部分小鼠未观察到肿
部，结果显示，多西环素饮食组CK/ALCAT1 KO小鼠 瘤（图2B），提示ALCAT1基因缺失影响肺部肿瘤的
的肺部未检测到肿瘤，在CK小鼠中检测到两只小鼠 发展。
肺部有肿瘤，其中一只右半肺被肿瘤侵蚀，正常饮 2.3 ALCAT1缺失减缓KRAS诱导的肺腺癌的发展
食组未发生肿瘤（图2A）。为了进一步研究ALCAT1 将多西环素饮食的时间延长到 12 周加剧肺部
缺失在肺腺癌中的作用，将多西环素饮食诱导时间 肿瘤的形成，并在实验终点将小鼠解剖取肺组织，
持续到 12 周，结果显示与多西环素饮食 8 周相比， 结果显示正常饮食组无肿瘤发生；多西环素饮食组
增加多西环素饮食时间加剧肺部肿瘤发展。多西 中与CK/ALCAT1 KO小鼠相比，CK小鼠肺部肿瘤对
