Page 40 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第8期
·1082 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年8月

体浓度均为1∶100。 性细胞浸润减少，上皮细胞变形坏死减少，表明肾
1.2.7 Western blot 组织损伤有所减轻。与RIR组相比，溶剂+RIR组的
取一定量的肾组织，加入预冷蛋白裂解液和蛋 肾组织损伤没有明显变化，仍然损伤较严重。
白磷酸酶抑制剂，充分研磨裂解后，12 000 r/min 离 2.3 AS⁃1 降低肾缺血再灌注损伤的肾组织炎症因
心30 min，取上清液，BCA法测蛋白浓度。蛋白煮沸 子表达
冷却后每组取80 μg上样，经电泳、转膜、5%脱脂奶 各组小鼠血清炎症因子 TNF⁃ɑ、IL⁃6 表达水平
粉溶液封闭 1 h 后，加入一抗：Caspase 3（1∶1 000）、 见图2。肾缺血再灌注损伤后，与sham组相比，RIR

Bcl⁃2（1∶1 000）、Bax（1∶1 000）、p⁃p65（1∶1 000），4℃ 组 TNF⁃α的表达量升高了 107.22%（86.225±4.277
封闭孵育过夜（摇床）。次日复温30 min，TBST洗膜3 vs. 178.671±6.303，n=7，P < 0.01），IL⁃6 的表达量升
次，分别加入相应的 HRP 标记的二抗（1∶3 000），常 高了 117.68%（101.980±6.159 vs. 221.994±7.512，n=
温孵育2 h（摇床），TBST洗膜3次，采用ECL化学发 7，P < 0.01）。AS⁃1 处理后，与溶剂+RIR 组相比，
光试剂盒（Thermo公司，美国）显色曝光。 TNF⁃α的表达量降低了 36.67%（178.671±6.303 vs.

1.3 统计学方法 113.144±6.700，n=7，P < 0.01），IL⁃6的表达量降低了
采用 GraphPad Prism 5 统计软件分析。计量资 29.60%（221.994±7.512 vs. 156.272±3.652，n=7，P <
料以均数±标准差（x ± s）表示，实验数据经单因素方 0.01）。与 RIR 组相比，溶剂+RIR 组的 TNF⁃α、IL⁃6
差分析（one⁃way ANOVA）比较，组间两两比较采用q 表达量无明显变化。
检验。P＜0.05为差异有统计学意义。 2.4 AS⁃1 减轻肾缺血再灌注损伤的肾组织 CD68 +
和MPO炎症细胞浸润
2 结 果
肾组织 CD68 和 MPO 免疫组化（图 3）显示，与
+
+
2.1 AS⁃1改善肾缺血再灌注损伤的肾功能。 sham 组相比，RIR 组 CD68 和 MPO 炎症细胞明显增
各组小鼠血清 Scr 及 BUN 水平比较见表 1。与 多。AS⁃1处理后，炎性细胞浸润减少。与RIR组相
sham 组相比，RIR 组 Scr 和 BUN 均显著升高（P＜ 比，溶剂+RIR组的炎性细胞浸润没有明显变化。
0.01）。与溶剂+RIR 组相比，AS⁃1 处理后可以明显 2.5 AS⁃1减轻肾缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡
降低肾再灌注损伤后 Scr 及 BUN 水平（P＜0.01）。 各组小鼠Cleaved caspase3、Bcl⁃2、Bax的蛋白表
与 RIR 组相比，溶剂+RIR 组的 Scr 和 BUN 表达量无 达水平见图 4。Western blot 结果显示，肾缺血再灌
明显变化。 注损伤后，与 sham 组相比，RIR 组的 Cleaved cas⁃
pase3升高了110.01%（1.000±0.125 vs. 2.100±0.085，
表1 血清Scr及BUN水平
Table 1 The levels of serum Scr and BUN （x ± s） n=3，P < 0.01），Bax 的表达量升高了54.47%（1.000±
组别 Scr（μmol/L） BUN（μmol/L） 0.050 vs. 1.545±0.031，n=3，P < 0.01），Bcl⁃2的表达量
sham（n=7） 08.07 ± 1.67 11.88 ± 1.58 降低了 41.85%（1.000±0.062 vs. 0.582±0.047，n=3，
RIR（n=7） 65.48 ± 5.20 ** 89.03 ± 5.57 ** P < 0.01）、Bcl⁃2/Bax 的比值降低了 62.37%（1.000±
AS⁃1+RIR（n=7） 16.18 ± 1.95 ## 16.26 ± 3.47 ## 0.059 vs. 0.376±0.029，n=3，P < 0.01）。与 RIR+溶剂
溶剂+RIR（n=7） 67.75 ± 2.98 ** 091.1 ± 4.90 ** 组相比，AS⁃1 处理后，Cleaved caspase3 的表达量下
##
**
与 sham 组相比，P < 0.01；与 RIR 组和溶剂+RIR 组相比，P <
降了 22.29%（1.934±0.103 vs. 1.503±0.060，n=3，P <
0.01。
0.01）、Bax 的表达量下降了 26.05%（1.507±0.070 vs.
2.2 AS⁃1改善肾缺血再灌注损伤的肾组织形态。 1.115±0.031，n=3，P < 0.01），Bcl⁃2 的表达量升高了
肾组织 HE 染色结果见图 1。光镜下 sham 组肾 18.65%（0.566 ± 0.027 vs. 0.696 ± 0.025，n=3，P <
小球、肾小管结构清晰，未见明显炎性细胞浸润。 0.01），Bcl⁃2/Bax 的比值升高了 39.78%（0.376±0.018
与 sham 组相比，RIR 组肾小球毛细血管瘀血，肾小 vs. 0.624±0.008，n=3，P < 0.01）。与 RIR 组相比，溶
囊囊腔扩张，肾间质毛细血管扩张、弥漫性充血，肾 剂+RIR 组的 Cleaved caspase3、Bax、Bcl⁃2、Bcl⁃2/Bax
小管扩张严重、上皮细胞变形坏死或消失、刷状边 表达量无明显变化。
缘脱落，管壁变薄，部分呈蛋白管型，部分肾小管上 2.6 AS⁃1 抑制肾缺血再灌注损伤的肾组织 NF⁃
皮细胞萎缩，细胞浆内可见大小不一的空泡，结构 κBp65的磷酸化
紊乱。AS⁃1 处理后，肾间质毛细血管充血减轻、炎 各组小鼠在缺血45 min再灌注24 h后 p⁃p65蛋