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第42卷第8期      刁爱芹，张光际，王 卉，等. TIR/BB环拟似物AS⁃1对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用研究［J］.
                  2022年8月                    南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（08）：1080-1086                      ·1081 ·


                    急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）是一组以            1.2  方法
                急性肾功能减退为主要表现的临床综合征，具有发                            1.2.1 模型建立
                病率高、病情凶险、预后差的特点，严重的急性肾                                所有小鼠术前禁食 12 h，自由饮水。用 10%水
                损伤会发展为急性肾衰竭，导致肾功能在短时间                             合氯醛（0.4 mL/100 g）腹腔内注射麻醉，待麻醉起效
                内急剧减退，肾小球滤过率下降、血肌酐及尿素氮                            时用手术剪刀剪去腹部鼠毛，然后碘伏消毒，在剑
                迅速上升，并导致水、电解质及酸碱平衡失调，临                            突下约 0.5 cm 沿腹正中线切开皮肤和肌肉，暴露腹
                床上能采取的治疗措施非常有限，除肾替代治疗                             腔，找到并游离双侧肾蒂，用无创动脉夹夹闭双侧
                外尚缺乏有效的治疗手段            ［1-2］ 。肾缺血再灌注（renal        肾蒂。观察肾脏颜色变化，确认血流阻断，夹闭
                ischemia⁃reperfusion，RIR）是引起急性肾损伤的常               45 min 后取下动脉夹，小鼠肾脏颜色在短时间内由
                见原因，当肾部分切除术、肾移植、肾积水等手术                            暗褐色逐渐变为鲜红色，提示再灌注良好，逐层缝
                恢复供血供氧时，机体启动一系列炎症反应、自由                            合，苏醒后继续自由饮水，12 h后自由进食。
                基、氧化应激等刺激因素，使细胞代谢功能障碍及                            1.2.2 动物分组
                结构破坏更加严重         ［3-4］ 。炎症和细胞凋亡是 RIR 损                将 40 只小鼠随机分成 4 组（n=10）：假手术组
                伤常见的病理生理过程，一方面肾缺血再灌注损伤                           （sham组）、肾缺血再灌注组（RIR 组）、AS⁃1+肾缺血
                发生后能激活TLRs介导的信号通路，激活NF⁃κB介                        再灌注组（AS⁃1+RIR 组）、溶剂+肾缺血再灌注组
                导的炎症反应，促进一系列炎症介质、细胞因子等                           （溶剂+RIR 组）。各组分别做如下处理：sham 组与
                                  ［5］
                的表达，导致肾损伤 ；另一方面肾短暂缺血缺氧                            手术组操作一样，但不夹闭小鼠双侧肾动、静脉；
                时凋亡是肾小管上皮细胞主要的死亡模式，缺氧                             RIR 组在小鼠肾脏缺血 45 min 后恢复血液供应；
                时，细胞内的凋亡信号通路被激活，众多与凋亡相                            AS⁃1+RIR 组在术前 30 min 按剂量 50 mg/kg 腹腔注
                关的基因被诱导表达，而肾小管上皮细胞的调亡                             射AS⁃1；溶剂+RIR组在术前30 min按剂量50 mg/kg
                可导致肾组织的结构萎缩和肾细胞数目的减少，                             腹腔注射溶剂。
                也能导致并加重肾损伤            ［5-6］ 。因此，如何减轻炎症            1.2.3 血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）测定
                和肾小管上皮细胞凋亡对防治肾缺血再灌注损伤                                 术后24 h取各组小鼠眼球血，静置后在室温下
                有重要意义。                                            离心 10 min（3 000 r/min），取上清获得血清，检测
                    近年来，研究发现，一种模拟MyD88和IL⁃1R/IL⁃                  Scr、BUN。
                1R 受体同源区域（toll IL⁃1 receptor homology，TIR）        1.2.4 肾组织HE染色
                BB环状拟似物氢化肉桂基⁃L⁃缬氨酰吡咯烷（hydro⁃                          术后 24 h 处死各组小鼠取肾组织，在 10%福尔
                cinnmoy⁃L⁃valyl pyrrolidine，AS⁃1）能发挥抗炎作用          马林中固定，病理切片后标准HE染色，在普通光学
                用于退热 ，并能改善压力负荷诱导的心肌肥大 、                           显微镜下观察各组肾组织病理变化，通过计算肾小
                        ［7］
                                                           ［8］
                减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤 ，也能保护非酒精                            管损伤面积半定量评估肾小管间质损伤程度。每
                                            ［9］
                性脂肪性肝炎      ［10］ ，但其在肾缺血再灌注损伤中是否                  张切片在 200 倍光镜下随机选取皮髓质交界部 10
                具有保护作用还不清楚。因此，本研究将采用整体                            个不重叠视野观察肾损伤并评分。评估参数包括：
                小鼠肾缺血再灌注损伤模型，探讨AS⁃1对肾缺血再                          肾小管上皮细胞变形、坏死，刷状缘脱落，管型形
                灌注损伤是否也具有保护作用，如具有保护作用，                            成，炎症细胞浸润。评分标准：1 分（≤10%）；2 分
                其作用机制是否与减轻炎症和细胞凋亡相关，以期                           （11%~25%）；3 分（26%~45%）；4 分（46%~75%）；5
                                                                           ［11］
                为临床开发防治急性肾损伤或急性肾衰竭类药物                             分（≥76%） 。
                提供理论基础及实验依据。                                      1.2.5 ELISA法检测小鼠血清IL⁃6、TNF⁃ɑ水平
                                                                      按ELISA试剂盒说明书操作，取各组小鼠眼球血
                1  材料和方法
                                                                  血清，检测肾缺血再灌注后24 h的IL⁃6、TNF⁃ɑ水平，
                1.1  材料                                           用多功能微孔板检测仪（λ=450 nm）测定吸光度（A）。
                    SPF级8~10周雄性C57BL/6小鼠，体重18~22 g，               1.2.6 免疫组织化学染色
                由南京医科大学实验动物中心提供，将其置于温度                                取各组肾组织石蜡切片予以常规脱蜡处理，煮
               （22±2）℃、湿度 62%~65%、12 h 光照和黑暗交替的                   沸的枸橼酸缓冲液抗原修复，免疫组化染色步骤则
                房间中，给予标准食物和水喂养。                                   完全参考 SP 的试剂盒说明书进行，CD68 和 MPO 抗
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