Page 43 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 43

第42卷第8期      刁爱芹，张光际，王 卉，等. TIR/BB环拟似物AS⁃1对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用研究［J］.
                  2022年8月                    南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（08）：1080-1086                      ·1085 ·


                     A                                            理后，能有效增加肾脏肌酐及尿素氮清除能力，血
                                                 溶剂+RIR组
                                sham组  RIR组  AS⁃1+RIR组            清肌酐和尿素氮水平明显降低，肾组织病理形态损
                                                                  伤有所减轻，表明AS⁃1对小鼠肾缺血再灌注损伤具
                        p⁃p65                        65 kDa
                                                                  有保护作用。
                                                                      缺血再灌注损伤的病理反应与炎症反应密切
                       GAPDH                         36 kDa
                                                                  相关，炎症反应可以显著恶化肾缺血再灌注损伤。
                     B
                           2.0
                                      **           **             在缺血缺氧状态下，血小板、巨噬细胞、肾小管上皮
                                                                  细胞等细胞活化，释放大量促炎因子如 TNF⁃α、IL⁃
                           1.5
                          p⁃p65/GAPDH  1.0  *##                   6、黏附分子及其他趋化因子，在这些细胞因子、趋
                                                                  化因子及黏附分子的相互作用下，导致血管内皮细
                                                                  胞活化，血管通透性增加，大量炎性细胞浸润和聚
                           0.5
                                                                  集于组织间，增加氧自由基生产，造成炎症反应的
                            0
                             sham组  RIR组 AS⁃1+RIR组 溶剂+RIR组        级联放大反应，引起肾脏组织的损伤和功能的受
                                                                  损
                                                                        。因此，TNF⁃α、IL⁃6等含量的升高及炎性细
                                                                    ［14-15］
                   A：目的蛋白Western blot检测图；B：不同处理组NF⁃κB p⁃p65的      胞浸润增多可以作为炎症反应的指标。本研究中，
                                          **
                                   *
                蛋白表达。与sham组比较，P < 0.05，P < 0.01；与溶剂+RIR和RIR       小鼠肾缺血再灌注损伤后促炎因子 TNF⁃α、IL⁃6 的
                组比较，P < 0.01（n=7）。
                     ##
                                                                  表达明显增加，CD68 和MPO炎症细胞浸润增多，而
                                                                                     +
                           图5 NF⁃κB p65的磷酸化水平
                   Figure 5 The levels of NF⁃κB p65 phosphorylation  给予 AS⁃1 处理后，能有效减少促炎因子的释放并减
                                                                  轻炎症细胞的浸润，表明AS⁃1减轻肾缺血再灌注损
                9.6%，病死率占入院患者的20%，在ICU患者中病死                       伤、改善肾脏功能的作用可能与其抗炎症反应有关。
                率甚至达到 50%，全球每年死于 AKI 的患者有近                            细胞凋亡也是肾缺血再灌注损伤的重要发病
                200 万 。肾脏缺血再灌注损伤是肾脏外科手术中                          机制之一，肾缺血再灌注后可引起氧自由基大量聚
                     ［1］
                无法避免的病理生理过程，也是引起术后 AKI 或肾                         集，诱发肾小管上皮细胞的凋亡，肾细胞的凋亡可
                功能不全的主要原因，因此减轻肾脏缺血再灌注损                            导致肾组织的结构萎缩和肾细胞数目的减少，甚至
                伤是目前临床研究的热点，相关实验性研究有着重                            诱发肾功能的急剧下降           ［16］ 。Caspase 蛋白酶家族在
                要的临床治疗指导意义。已有研究报道提示，TIR/                          肾缺血再灌注损伤诱导的细胞调亡中发挥着重要
                BB 环拟似物 AS⁃1 主要通过抑制 IL⁃1R 与 MyD88 的               的作用，被认为是细胞调亡过程中的关键环节和执
                结合发挥其调控多种病理生理学进程的作用，Zhu                           行者，Caspase 3 是 Caspase 家族中最主要的效应靶
                  ［8］
                等 发现 AS⁃1 可以抑制心肌肥大诱导的 NF⁃κB 结                     点，细胞凋亡发生时，Cleaved caspase3 的表达明显
                合活性的增加及 MAPK 信号的激活，同时抑制心肌                         增 加  ［17］ ，本 研 究 中 ，小 鼠 肾 缺 血 再 灌 注 损 伤 后
                肥大诱导的细胞凋亡，发挥心脏保护作用；Cao 等                    ［9］   Cleaved caspase3的表达明显升高，而给予AS⁃1处理
                研究发现 AS⁃1 能抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的                         后，能明显抑制其表达升高的现象。Bcl⁃2家族在细
                NF⁃κB 的核转录活性，降低心肌组织中炎性因子                          胞凋亡中也发挥着重要的决定作用，其是促凋亡和
               （IL⁃1α、IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α）的表达水平，保护缺血                 抗凋亡基因家族中的主要成员，包括促凋亡基因如
                再灌注引起的心功能损伤。周扬等                 ［10］ 研究也发现        Bax、Bak等和抗凋亡基因如Bcl⁃2等，细胞凋亡的发
                AS⁃1 能减少创伤失血性休克大鼠再灌注引起的                           生与Bcl⁃2和Bax表达的上调或下调密切相关，相关
                IL⁃1β、TNF⁃α的表达发挥肝脏保护作用。因此，本                       研究表明，在缺血再灌注损伤过程中存在Bcl⁃2的表
                文考虑研究 AS⁃1 对肾缺血再灌注的保护作用。本                         达下调和Bax的表达上调、两者的比值降低，而通过
                研究依据相关文献报道采用左、右肾蒂结扎缺血                             预处理干预措施使Bcl⁃2表达上调和Bax表达下调、
                45 min，恢复灌注 24 h 建立小鼠肾缺血再灌注模                      两者的比值升高后，能够减轻缺血再灌注损伤诱导
                型 ［12-13］ 。与假手术组比较，手术组肾功能指标血清                     的细胞凋亡     ［17］ 。本研究中，小鼠肾缺血再灌注损伤
                Scr 和 BUN 水平明显升高，肾组织病理形态有明显                       24 h 后，Bcl⁃2 的表达明显减少，Bax 的表达明显增
                的损伤，表明模型制备成功，肾功能明显受损。与                            加，两者的比值降低。而给予 AS⁃1 处理后，能明显
                手术组和溶剂组相比，术前30 min腹腔注射AS⁃1处                       上调 Bcl⁃2 的表达、下调 Bax，使 Bcl⁃2/Bax 的比值显
   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48