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第42卷第9期
               ·1210 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年9月


              significant antinociceptive effect in formalin⁃induced inflammatory hyperalgesia and its possible mechanism may be by reducing the
              expression of pro⁃inflammatory factors IL⁃6 and TNF⁃α.
             ［Key words］ GDF ⁃15；acute pain；inflammatory pain；GFRAL；IL⁃6；TNF⁃α
                                                                           ［J Nanjing Med Univ，2022，42（09）：1209⁃1215］



                  国际疼痛研究学会（International Association for        成员。在功能上，GDF⁃15与多种疾病相关，目前已报
                                                                                                     ［9］
              the Study of Pain，IASP）于 2020 年对疼痛的定义进            道的有肥胖 、糖尿病 、心衰和心肌梗死 、慢性阻
                                                                           ［7］
                                                                                   ［8］
              行了更新，将疼痛定义为一种与实际存在或潜在的                            塞性肺疾病      ［10-11］ 、癌症及恶病质   ［12］ 以及炎症  ［13］ 。然
              组织损伤相关的令人不快的感觉和情感体验，或与                            而，GDF⁃15 在疼痛中的作用目前研究很少，机制尚
              其相似的经历      ［1-2］ 。按照病程分类，疼痛可分为急性                 不十分清楚。因此，本研究采用经典的福尔马林诱
              疼痛和慢性疼痛。急性疼痛为新近产生的、持续时                            导双相疼痛模型探讨了 GDF⁃15 对疼痛的作用，并
              间较短的疼痛，与明确的损伤或疾病有关，有着急性                           在此基础上初步探究了GDF⁃15的镇痛作用机制。
              警告的功能。慢性疼痛被认为是持续超过正常愈合
                                                                1  材料和方法
              时间的疼痛，通常当疼痛持续或复发超过 3~6 个月
              时可被视为慢性疼痛，其严重损害患者的身心健                             1.1  材料
              康 。在中国，约30%的人口受到慢性疼痛的困扰，                               重组人 GDF⁃15 蛋白（His 标签）（货号：10936⁃
                ［3］
              其中大部分是年长患者，尤其是 65 岁以上的老年                          H07Y，北京义翘神州有限公司）；Anti⁃GFRAL 兔多
              人，有80%~85%的人患有疼痛相关疾病 。当患者                         克隆抗体（货号：ab235111，Abcam公司，美国）；神经
                                                  ［4］
              处于长期疼痛难忍的状态下，不仅会影响患者的身                            元核抗原（neuronal nuclei antigen，NeuN）鼠单克隆
              体功能，通常还会伴随有焦虑、抑郁等心理疾病的                            抗体、离子钙结合衔接分子 1（ionized calcium bind⁃
              发生，严重影响患者的正常生活。同时，长期的疼                            ing adapter molecule 1，Iba⁃1）鼠单克隆抗体、胶质纤
              痛治疗也会给患者和社会造成巨大经济负担。目                             维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）鼠
              前，临床上治疗疼痛的药物主要有非甾体类抗炎                             单克隆抗体（Millipore 公司，德国）；Alexa⁃555⁃标
              药、阿片类药物以及一些辅助性镇痛药物。然而这                            记的羊抗兔二抗、Alexa⁃488 标记的羊抗小鼠二抗
              些药物在临床上使用时，在安全性和有效性方面存在                           （Invitrogen 公司，美国）；TRIzol（Thermo Fisher 科技
              一定局限性，因此对新型镇痛药存在紧迫的需求。                            公司，美国）；cDNA 逆转录试剂盒（Toyobo 有限公
                                                                               ®
                  生 长 分 化 因 子 15（growth differentiation factor  司，日本）；Hieff qPCR SYBR Green Master Mix（上
              15，GDF⁃15），又称巨噬细胞抑制性细胞因子1（macro⁃                  海翌圣生物科技股份有限公司）。
              phage inhibitory cytokine⁃1，MIC⁃1）、NSAID激活基因           激光共聚焦显微镜 SP8 型、恒温冰冻切片机切
              ⁃1（NSAID activated gene⁃1，NAG⁃1）、胎盘转化生长           片（Leica公司，美国）；电泳仪、电转仪（Bio⁃Rad Labo⁃
              因 子 ⁃ β（placental transformation growth factor ⁃ β，  ratories 公司，美国）；荧光实时定量 PCR 仪（Eppen⁃
              PTGFB）或前列腺衍生因子（prostate derived factor，           dorf有限公司，德国）。
                   ［5］
              PDF） ，属于转化生长因子 β（transforming growth                   8~12周龄雌性KM小鼠（体重22~25 g左右），购
                                                        ［6］
              factor β，TGF⁃β）超家族成员。它是由Bootcov等 于                自上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号：SCXK
              1997 年首次从人骨髓单核细胞系 U937 的 cDNA 文                   （沪）2003⁃0003。饲养于上海交通大学药学院实验动
              库中分离并鉴定出，由308个氨基酸组成，在N端含                          物中心，饲养环境温度为（22 ± 2）℃，湿度为（55 ±
              有29个氨基酸的信号肽，成熟肽的长度为195~308个                       5）%，光照时间为7：00~19：00，水与食物供应充足，可
              氨基酸。研究发现GDF⁃15在细胞内以多种形式存                          自由摄取。所有动物实验均经上海交通大学实验动
              在：GDF⁃15前体单体（40 kDa）、GDF⁃15前体二聚体                  物伦理与使用委员会批准（批准编号：202201002）。
             （80 kDa）以及成熟的 GDF⁃15 二聚体（30 kDa） 。                 1.2  方法
                                                         ［5］
              GDF⁃15受体胶质细胞源性神经营养因子家族α样受                         1.2.1  福尔马林诱导双相疼痛模型的建立与给药

              体（glial cell⁃line derived neurotrophic factor receptor  方法
              alpha⁃like，GFRAL）是胶质细胞源性神经营养因子                         GDF⁃15鞘内注射给药：16只KM小鼠分2组，每
              家族（glial cell derived neurotrophic factor，GDNF）的  组 8 只，分别为溶剂对照组和实验组。实验前将小
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