Page 8 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第11期
               ·1480 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年11月


              of NF⁃κB/NLRP3 signaling pathway.
             ［Key words］ ulcerative colitis；hydroxychloroquine；macrophage polarization
                                                                           ［J Nanjing Med Univ，2023，43（11）：1479⁃1486］





                  溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种以             ECL 显影液（Thermo Fisher 公司，美国），HCQ（Sigma
              结肠黏膜损伤及肠道稳态破坏为特征的慢性、非特                            公司，美国），NF⁃κB通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵
                             ［1］
              异性炎症性疾病 。我国 UC 发病率呈逐年上升趋                          （pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC）（杭州碧云天公
                ［2］
              势 。UC 的发病机制与环境因素、遗传易感性、免                          司），DSS（MP公司，美国），胶原酶Ⅳ（Biosharp公司，
              疫功能紊乱和肠道菌群失衡相关，免疫因素在 UC                           美国），DNA酶Ⅰ（Sigma公司，美国），Percoll溶液（GE
              发病中发挥了重要作用           ［3-4］ 。在UC患者和动物模型            公司，美国）。
              的结肠组织中存在大量巨噬细胞浸润                 ［5-6］ 。          1.2  方法
                  巨噬细胞是固有免疫反应的一线应答者 。巨                          1.2.1 动物分组及DSS结肠炎模型的建立
                                                      ［7］
              噬细胞超极化引起的炎症反应在UC中具有重要作                                 将小鼠随机分为3组。对照组（n=6）：饮用正常
              用。在不同环境刺激下、巨噬细胞表型及功能处于                            水，每天给予 200 μL 纯水灌胃；DSS 组（n=6）：自由
              M1型（促炎或经典活化型）及M2型（抗炎或替代活                          饮用 3.5% DSS 溶液，并每天给予 200 μL 纯水灌胃；
                                 ［8］
              化型）的动态转化中 。UC 患者肠黏膜中促炎的                           DSS+HCQ组（n=6）：自由饮用3.5% DSS溶液，并每天
                                    ［9］
              M1 型巨噬细胞数量增加 ，M1 型巨噬细胞产生白                         给予200 μL HCQ溶液（60 mg/kg）灌胃。构建DSS诱
              介素（interleukin，IL）⁃12、IL⁃23和IL⁃1β、促进Th1和          导的小鼠结肠炎模型：配制DSS浓度为3.5%的液体，
              Th17 免疫应答，加重肠道上皮损伤             ［10］ 。羟氯喹（hy⁃      小鼠自由饮用DSS溶液7 d后，换成正常水饮用2 d。
              droxychloroquine，HCQ）作为经典的抗疟药，具有免                 1.2.2  疾病活动指数（disease activity index，DAI）
              疫调节作用，常用于系统性红斑狼疮                  ［11］ 、类风湿关      评分
              节炎  ［12］ 及抗磷脂抗体综合征        ［13］ 等疾病的治疗。本                每日称量小鼠体重、观察大便性状、检测大便隐
                                                                                                          ［14］
              研究运用体外诱导的骨髓来源巨噬细胞（bone mar⁃                       血、观察肛周出血等，根据表1计算小鼠DAI评分 。
              row⁃derived macrophage，BMDM）及葡聚糖硫酸钠
                                                                                  表1  DAI评分
             （dextran sulfate sodium salt，DSS）诱导的小鼠急性结                         Table 1 Score of DAI
              肠炎模型，探讨 HCQ 在肠道炎症中的作用及调控
                                                                      评分参数                描述         得分（分）
              M1/M2型巨噬细胞分化的可能机制。
                                                                  体重下降                    ≤1%           0
              1  材料和方法                                                                  >1%~5%          1
                                                                                        >5%~10%         2
              1.1  材料                                                                  >10%~20%         3
                  8周龄、体重18~22 g的C575L/6雄性小鼠（维通                                           >20%           4
              利华实验动物技术有限公司），在南京医科大学实                              大便性状                    正常            0
              验动物中心、SPF 级环境饲养。动物实验严格遵循                                                 松散/半成形           2
                                                                                       稀便/不成形           4
              实验动物饲养及操作规范，符合3R原则，且通过南京
                                                                  大便隐血/肉眼血便               正常            0
              医科大学实验动物福利伦理审查委员会审核（IACUC⁃
                                                                                        隐血阳性            2
              1912008）。
                                                                                        肉眼血便            4
                  Percp/cy5.5⁃CD11b、FITC⁃CD45抗体、APC⁃F4/80
              以及 PE⁃CD86 等流式抗体（BioLegend 公司，美国）；                1.2.3 结肠组织病理学评分
              p⁃STAT1、STAT1、IRF5、NF⁃κB、p⁃NF⁃κB、NOD 样                 小鼠结肠组织行固定、包埋、切片及 HE 染色

              受体热蛋白结构域相关蛋白 3（NOD⁃like receptor                  后，将切片置于光学显微镜下观察，具体评分标准
              thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、  参考相关文献 （表2）。
                                                                             ［15］
              ASC、pro⁃Caspase⁃1、Caspase⁃1以及β⁃Actin蛋白免疫          1.2.4 实时荧光定量PCR（RT⁃PCR）
              印记实验一抗（Cell Signaling Technology公司，美国）；                利用TRIzol将结肠组织或细胞裂解，氯仿、异丙
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