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第43卷第12期 李杨夏,佟 晴,程 越,等. TLR2/NF⁃κB通路介导MPP 诱导的RSC96细胞凋亡与自噬[J].
+
2023年12月 南京医科大学学报(自然科学版),2023,43(12):1623-1629 ·1627 ·
A B
Hoechst TUNEL Merge(×10) Large(×40)
( % ) 6 **
TUNEL阳性细胞率 2 0
MPP + 8 4
+
MPP + +CU⁃CPT22 MPP +CU⁃CPT22
MPP
+
C D E F
1.5 **
** + MPP +CU⁃CPT22 **
TLR2 mRNA 相对表达量 1.0 caspase⁃3 MPP 35 kDa cleaved caspase⁃3/ caspase⁃3 蛋白相对表达量 1.5 Bcl⁃2/Bax 蛋白相对表达量 3 2 1
+
1.0
0.5
0.5
cleaved caspase⁃3/
β⁃actin 16 kDa
42 kDa
0 + Bcl⁃2 26 kDa 0 + 0 +
MPP +CU⁃CPT22 β⁃actin 20 kDa MPP +CU⁃CPT22 MPP +CU⁃CPT22
MPP
MPP
MPP
Bax
+
+
+
42 kDa
A:各组TUNEL染色结果;B:各组TUNEL阳性细胞百分比的定量分析(n=4);C:RT⁃qPCR检测各组细胞TLR2 mRNA相对表达水平(n=8);
D:Western blot检测各组细胞cleaved caspase⁃3/caspase⁃3和Bcl⁃2/Bax蛋白表达水平代表性图像;E:各组cleaved caspase⁃3/caspase⁃3蛋白表达水
平的定量比较(n=3);F:各组Bcl⁃2/Bax蛋白表达水平的定量比较(n=3)。两组比较,P<0.01。
**
图4 抑制TLR2减轻MPP+诱导的RSC96细胞凋亡
Figure 4 Inhibition of TLR2 attenuates MPP ⁃induced apoptosis in RSC96 cells
+
A B C 1.5
+
+ MPP +CU⁃CPT22 3 * 1.0 *
MPP 蛋白相对表达量 4
LC3Ⅰ 16 kDa LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 2 P62蛋白相对表达量
LC3Ⅱ 14 kDa 0.5
β⁃actin 42 kDa 1
0 0.0
P62 62 kDa + +
MPP +CU⁃CPT22 MPP +CU⁃CPT22
β⁃actin 42 kDa MPP MPP
+
+
A:Western blot 检测各组细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62蛋白表达水平代表性图像;B:各组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平的定量比较(n=3);C:各
组P62蛋白表达水平的定量比较(n=3)。两组比较,P<0.05。
*
图5 抑制TLR2缓解MPP 诱导的RSC96细胞自噬水平的降低
+
Figure 5 Inhibition of TLR2 alleviates MPP ⁃induced reduction in autophagy level in RSC96 cells
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SC作为一种外周神经胶质细胞,从神经嵴发育 者腓肠神经纤维松散分布,神经传导速度减慢,感
而来,成熟的 SC 保留其表型可塑性,在周围神经再 觉神经动作电位幅度降低,伴有轴突变性和脱髓鞘
生过程中充当重要角色,SC的其他非典型功能包括 改变。此外,本课题组还发现慢性 MPTP 模型小鼠
调节免疫反应以及表皮的触觉受体 [19] 。以往研究 坐骨神经同样出现脱髓鞘改变,SC 肿胀明显,部分
发现,在多发性硬化中,中枢神经系统存在明显的 细胞甚至出现破碎,且这种改变与神经功能障碍和
[8]
脱髓鞘改变和少突胶质细胞死亡,髓鞘功能丧失, 神经炎症密切相关 。然而,本课题组以往的研究
神经冲动传导受到抑制,此外,多系统萎缩患者 SC 均是在体水平,尚未在细胞水平探究其损伤过程及
中存在p⁃α⁃syn沉积 [20] 。在本课题组前期的研究中, 可能机制。RSC96 细胞系广泛应用于糖尿病、周围
PD患者存在周围神经损伤,与健康对照相比,PD患 神经损伤、骨科领域的研究,具有培养周期短,可多