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第43卷第2期             吴周璐，龚颖芸，付真真，等. 肥胖代谢状态与内脏脂肪免疫细胞的关联分析［J］.
                  2023年2月                    南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（2）：149-155，178                     ·151 ·


                1.04 mmol/L（男 性）。 MHO 组 的 定 义      ［2，19］ ：患 者    本中的占比分数。
                BMI≥28 kg/m ，空 腹 血 糖 ＜5.6 mmol/L ，收 缩 压           1.3  统计学方法
                            2
                ＜130 mmHg，舒张压＜85 mmHg，TAG＜1.7 mmol/L，                 应用 SPSS 25 软件进行相关数据的统计分析，
                且既往无高脂血症、高血压、糖尿病等病史。Lean                          并对各项指标进行正态分布和方差齐性检验。3组
                组的定义：患者BMI＜28 kg/m 。                              间比较应用单因素方差分析，事后比较应用邓尼特t
                                          2
                1.2  方法                                           检验；相关性分析应用 Pearson 相关分析。P＜0.05
                1.2.1 RNA提取及RNA⁃seq测序                             为差异有统计学意义。图片由 GraphPad Prism 8 软
                    收集的内脏脂肪组织标本均通过TRIzol法提取                       件绘制。
                RNA，使用 Qiagen RNeasy 试剂盒纯化后，通过琼脂
                                                                  2  结 果
                糖凝胶电泳、Nanodrop 及 Agilent2100 确认每个样品
                的 RNA 质量。基于 Illumina 平台的 NEBNext Ultra            2.1  3组人群分组情况及相关临床指标
                RNA Library Prep Kit 制备每个样品的 RNA⁃seq 库，               首先对相关患者的代谢特征数据（如年龄、性
                并在Illumina HiSeq 4000平台上进行RNA⁃seq。                别比、BMI 及空腹血糖等）按照分类标准进行统计，
                1.2.2 免疫细胞构成比计算                                   最终符合标准的Lean组、MHO组及MUO组入组人数

                    利 用 在 线 数 据 库 CIBERSORT（https：//ciber⁃        分别为11例、22例及26例，其具体临床数据见表1。
                sortx.stanford.edu/） ，对 RNA⁃seq 数据进行基于线           2.2  3组人群内脏脂肪组织中的免疫细胞占比情况
                                ［20］
                性支持向量回归原理的反卷积分析，可计算获得22                               将 3 组人群的内脏脂肪标本提取 RNA 并进行
                种不同类型和功能的免疫细胞在内脏脂肪组织样                             RNA⁃seq测序，利用在线数据库CIBERSORT进行数

                                                      表1 3组人群的临床指标
                                       Table 1 Clinical characteristics of three groups of participants  （x ± s）
                                               Lean组（n=11）             MHO组（n=22）               MUO组（n=26）
                    年龄（岁）                      041.18 ± 11.35          026.18 ± 5.79            030.07 ± 5.42
                    性别组成（女/男）                       9/2                     14/8                    13/13
                    BMI（kg/m）                  022.60 ± 1.97           040.91 ± 6.66            042.77 ± 7.40
                            2
                    收缩压（mmHg）                  117.09 ± 9.99           121.86 ± 8.38            149.46 ± 14.77
                    舒张压（mmHg）                  075.91 ± 9.26           073.36 ± 8.65            090.31 ± 12.81
                    HbA1c（%）                        —                  005.38 ± 0.41            008.13 ± 2.25
                    TC（mmol/L）                 004.62 ± 0.89           004.13 ± 0.50            004.76 ± 0.79
                    TAG（mmol/L）                000.86 ± 0.17           001.08 ± 0.35            002.29 ± 1.27
                    HDL⁃c（mmol/L）              001.39 ± 0.43           001.10 ± 0.21            000.97 ± 0.17
                    LDL⁃c（mmol/L）              003.14 ± 0.63           003.03 ± 0.47            003.54 ± 0.64
                    空腹血糖（mmol/L）               005.04 ± 0.41           005.02 ± 0.41            009.01 ± 3.60
                    尿酸（μmol/L）                 284.51 ± 65.15          431.05 ± 138.13          391.51 ± 140.09
                    C反应蛋白（mg/L）                     —                  006.79 ± 4.81            009.84 ± 6.15
                   HbA1c：糖化血红蛋白；TC：总胆固醇；TAG：甘油三酯；HDL⁃c：高密度脂蛋白胆固醇；LDL⁃c：低密度脂蛋白胆固醇。


                据处理分析，可以推算得到共22种免疫细胞在VAT                          Lean组与MUO组的Treg比例存在统计学差异（Lean
                中的占比情况。                                           组与MUO 组比较，P=0.031，图2A）。而被激活的自
                    与 Lean 组比较，MHO 及 MUO 组人群 VAT 中的               然杀伤（natural killer，NK）细胞则在 Lean 组中占比
                巨噬细胞占比变化明显，其中以 M2 型巨噬细胞表                          较高，为（4.53±2.80）%，在肥胖的两组人群间比较，
                达增加为主（图1）。                                        MUO 组被激活的 NK 细胞占比有高于 MHO 组的趋
                    通过分析各类免疫细胞在组间的表达差异，发                          势，但两组间无统计学差异［MHO组（1.78±1.73）％，
                现调节性 T 细胞（regulatory T cell，Treg）在 3 组间的          MUO 组（2.32±1.87）％，MHO 组与 MUO 组比较，P=
                比例呈依次递减的趋势［Lean 组（7.08±4.04）％，                    0.361，图 2B］。免疫细胞中的巨噬细胞亚群中，M1
                MHO 组（5.69±3.45）％，MUO 组（4.08±2.59）％］，且            型巨噬细胞的占比在 3 组间没有明显改变［Lean 组
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