Page 8 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第3期
               ·298 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年3月


              expression promotes the proliferation and clonal formation of GBM cells.
             ［Key words］ glioblastoma；ZBTB3；AMPK；proliferation；clone formation
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2023，43（03）：297⁃303］





                  胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤，约占恶                           肺癌和胰腺癌细胞的增殖或转移                ［11-12］ 。AMPK也可
              性脑肿瘤的 80%，主要起源于大脑的神经胶质细                           促进肾癌细胞增殖，其机制涉及 AMPK 募集 PKM2
              胞 ［1-2］ 。世界卫生组织根据病理学将胶质瘤分为Ⅰ~                      和β⁃Catenin 形成复合物，促进细胞增殖相关基因
              Ⅳ级。Ⅰ~Ⅱ级属于低级别胶质瘤，Ⅰ级主要是毛                            （CCND1 和 c⁃Myc）的表达     ［13］ 。而 p38MAPK 能增加
              细胞型星形胶质瘤，Ⅱ级包括弥漫性星形细胞瘤、                            ZEB1 和 FOXC1 基因的表达，从而促进 GBM 或结直
              少突胶质瘤；Ⅲ~Ⅳ级属于高级别胶质瘤，其中Ⅲ级                           肠癌细胞的侵袭和转移             ［14- 15］ 。此外，Akt1 能上调
              为间变性胶质瘤，Ⅳ级为胶质母细胞瘤（glioblastoma，                   BCL⁃2 基因表达或促进 NF⁃κB 活化，进而增加乳腺
              GBM），是恶性程度最高的胶质瘤 。胶质瘤具有显                          癌或GBM细胞的增殖水平            ［16-17］ 。综上所述，AMPK、
                                           ［3］
              著增殖和侵袭生长的能力，并最终形成颅内占位性                            p38MAPK 和 Akt1 均能促进下游基因的表达，参与
              病变，导致患者死亡。目前针对胶质瘤的治疗主要                            肿瘤病变，但有关 AMPK、p38 MAPK 及 Akt1 能否通
              是手术切除，并辅以放疗和化疗，但患者5年生存率                           过上调ZBTB3基因的表达促进GBM细胞增殖，目前
              依然很低，尤其是 GBM 患者的平均生存时间不足                          尚不清楚。
              2 年 ［4-5］ 。因此探究 GBM 的发病机制或将有利于寻
                                                                1  材料和方法
              找新的干预方法。
                  锌指和 BTB 结构域蛋白 3（zinc finger and BTB           1.1  材料
              domain containing 3，ZBTB3）属于ZBTB家族成员，是                 抗总p38MAPK（t⁃p38MAPK）、磷酸化p38MAPK
              一种转录因子，其蛋白包含 1 个锌指结构域和 1 个                        （p⁃p38MAPK）、总 AMPK（t⁃AMPK）、磷酸化 AMPK
              BTB结构域，其锌指结构域通过与DNA特定元件结                          （p⁃AMPK）、总 Akt1（t⁃Akt1）、磷酸化 Akt1（p⁃Akt1，
              合，启动靶基因转录，而 BTB 结构域则可与其他转                         Ser473）抗体（Cell Signaling Technology 公司，美国）；
              录调节因子相互作用，介导染色质重塑和基因激                             抗 ZBTB3 抗体（成都正能生物公司）；β⁃actin 抗体
                ［6］
              活 。研究表明，ZBTB3高表达可促进黑色素瘤、肺                         （Affinity 公司，美国）；HRP 标记的山羊抗兔和山羊
              癌和乳腺癌细胞增殖，其分子机制涉及ZBTB3抑制                          抗鼠二抗（Biosharp 公司，美国）。CCK⁃8 试剂盒、
                                                    ［7］
              caspase⁃9、caspase⁃3 蛋白活化和 ROS 生成 。有文              Perifosine（Akt1 抑制剂）、SB203580（p38 抑制剂）和
              献报道，ZBTB3 可上调音猬因子（Sonic hedgehog，                 Compound C（AMPK 抑制剂）（MCE 公司，美国）。胎
              SHH）表达，诱发子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵                           牛 血 清（fetal bovine serum，FBS）（Wisent 公 司 ，美
                ［8］
              袭 。提示，ZBTB3 高表达能促进某些肿瘤的发生                         国），DMEM培养基（Gibco公司，美国）。35 mm细胞
              和发展。但有关 GBM 组织和细胞中 ZBTB3 表达及                      培养皿（Thermo Fisher Scientific 公司，美国）。人
              其对GBM的影响，目前尚不知晓。故本研究拟检测                           GBM 细胞系（U87、U373、U251）购自中科院上海细
              人GBM组织和细胞系中ZBTB3的表达情况，并探讨                         胞库。
              其对GBM细胞增殖的影响。                                     1.2  方法
                  众所周知，在真核细胞中，基因表达会受到某                          1.2.1 细胞培养
              些上游信号分子的调控，肿瘤细胞亦是如此，如                                  将 U87、U373、U251 细胞接种于 3 mL 含 10%
              AMP 活化蛋白激酶（AMP⁃activated protein kinase，          FBS 的 DMEM 完全培养液中，置于 37 ℃、5%CO2孵

              AMPK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen⁃acti⁃              箱中培养2 d。当细胞融合度为90%左右时，用1 mL
              vated protein kinase，p38MAPK）、磷酸肌醇 3⁃激酶           胰蛋白酶消化细胞，离心后重悬细胞，按1∶3比例接
             （PI3K）/Akt1 等均可调控肿瘤细胞基因表达                 ［9- 10］ 。  种于新的细胞培养皿中，进行传代，并继续置于孵
              AMPK 通过上调糖酵解和血管生成相关基因（如                           箱中培养。
              GLUT1 和 VEGF）的表达以及诱导上皮间质转化                        1.2.2 ZBTB3表达的检测
             （epithelial mesenchymal transformation，EMT），促进          反 转 录 PCR（reverse transcription ⁃ PCR，RT ⁃
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