Page 10 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第3期
·300 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年3月

（U251、U373、U87），检测其ZBTB3的表达情况，结果 2.2 沉默ZBTB3基因抑制U87细胞增殖和克隆形成
显示，U373 和 U87 细胞高表达 ZBTB3 的 mRNA（图 构建针对人ZBTB3基因的shRNA质粒（shZBTB3⁃1、
1C、D）和蛋白（图1E、F），以U87细胞最为显著，故后续 shZBTB3⁃2、shZBTB3⁃3）和对照shRNA质粒（shCTR），
实验拟选用U87细胞开展相应的体外实验。 将shCTR、shZBTB3⁃1、shZBTB3⁃2和shZBTB3⁃3分别

A B C
1.0 ZBTB3低表达（n=81） U251 U373 U87
3.0 ZBTB3高表达（n=81） ZBTB3 —572 bp
0.8 Log⁃rank P=0.16
2.5 HR（high）=1.3 GAPDH —496 bp
（ TPM+1 ） 2.0 生存率 0.6 P（HR）=0.16
1.5
log2 1.0 0.4
0.2
0.5
0.0 0.0
肿瘤组织 正常组织 0 20 40 60 80
（n=163）（n=207） 生存时间（月）

D 10 8 ** E ZBTB3 U251 U373 U87 —62 kDa F 8

ZBTB3 mRNA相对表达量 6 4 β⁃actin —42 kDa ZBTB3蛋白相对表达量 6 4 **

0 2 2 0
U251 U373 U87 U251 U373 U87
A：GEPIA数据库比对GBM患者肿瘤组织和正常组织中ZBTB3的表达情况；B：GEPIA数据库分析ZBTB3表达与GBM患者预后的相关性；
C、D：RT⁃PCR（C）和 qPCR（D）检测 GBM 细胞系中 ZBTB3 的 mRNA 表达水平；E、F：Western blot 检测 GBM 细胞系中 ZBTB3 的蛋白表达量（E：
Western blot电泳条带；F：半定量分析柱形图）。与U251比较，P < 0.01（n=3）。
**
图1 GBM组织和细胞中ZBTB3的表达情况
Figure 1 ZBTB3 expression in glioma tissues and cells

转染 U87 细胞，进行靶点筛选。发现 shZBTB3⁃2 可 分别阻断 p38MAPK、AMPK 和 Akt1 的磷酸化，但是
明显降低ZBTB3的mRNA（图2A、B）和蛋白（图2C、 对其本身蛋白的表达均没有影响（图3A、B）。此外，
D）表达，故后续采用 shZBTB3⁃2 进行实验，并简称 用 Compound C 处理 U87 细胞后，ZBTB3 的 mRNA
为 shZBTB3。将 shZBTB3 转染 U87 细胞，48 h 后行 （图 3C、D）和蛋白（图 3E、F）表达均明显降低，而
CCK⁃8检测细胞增殖水平，结果发现，与shCTR转染 SB203580 和 Perifosine 对 ZBTB3 的表达均无显著影
组相比，转染 shZBTB3 后可显著抑制 U87 细胞的增 响。提示，AMPK 信号分子正向调控 GBM 细胞
殖水平（图2E），同时开展了克隆形成实验，2周后观 ZBTB3基因的表达。
察发现，转染 shZBTB3 能明显抑制 U87 细胞的克隆 2.4 抑制AMPK对U87细胞增殖和克隆形成的影响
形成（图2F、G）。上述结果表明，ZBTB3基因的表达 为了观察AMPK对U87细胞增殖和克隆形成的
能增强GBM细胞的增殖和克隆形成能力。 调控作用，使用 AMPK 抑制剂 Compound C 处理 U87

2.3 抑 制 p38MAPK、AMPK 和 Akt1 对 U87 细 胞 细胞，同时设DMSO溶剂对照组，48 h后行CCK⁃8实
ZBTB3表达的影响 验检测细胞的增殖水平，2周后开展结晶紫染色，并
为了进一步探究U87细胞中调控ZBTB3表达的 计数细胞克隆。结果表明，Compound C既可明显抑
上游信号分子，使用 p38MAPK 抑制剂（SB203580）、 制U87细胞的增殖（图4A），又能显著抑制U87细胞
AMPK抑制剂（Compound C）、Akt1抑制剂（Perifosine） 的克隆形成（图 4B、C）。提示 AMPK 信号分子的活
分别处理 U87 细胞，分别提取 RNA 和蛋白样，检查 化可增强U87细胞的增殖和克隆形成能力。

p38MAPK、AMPK、Akt1 的磷酸化水平以及 ZBTB3
3 讨 论
的 mRNA 和蛋白表达量。结果表明，与 DMSO 溶剂
对照组相比，SB203580、Compound C 和 Perifosine 可 GBM属于胶质瘤Ⅳ级，是恶性程度最高的胶质