Page 33 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第4期 李 蓉，刘 露，朱夕陈，等. 洛伐他汀调节NMDA受体功能减缓NMDA兴奋性毒性损害［J］.
2023年4月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（04）：468⁃474 ·471 ·

A Vehicle NMDA Glu B
（ 个/视野 ） 40 *** ***
35
30
TUNEL阳性细胞数 10 5
25
15
LOV LOV+NMDA APV+Glu 20
0
Vehicle LOV NMDA LOV+NMDA Glu APV+Glu

A：各组TUNEL染色结果；B：各组TUNEL染色阳性细胞的定量比较；两组比较， P < 0.001（n=3）。
***
图2 TUNEL染色检测细胞凋亡
Figure 2 Cell apoptosis analyzed by TUNEL assay

2.2 LOV减少NMDA诱导的NR2B下调及细胞表面 NR1、Glu2R 的蛋白水平，LOV 预处理能显著减少
NR2B的丢失 NMDA 诱导的细胞表面 NR2B 丢失（P < 0.05）。进
使用蛋白免疫印迹法同步检测 NMDA 和 Glu 一步研究表明，随着NMDA 处理时间的延长，NR2B
对 NR2B 蛋白表达的影响。结果显示，NMDA 和 的表达逐渐下降直至丢失，提示 NMDA 对 NR2B 的
Glu 减少 NR2B 的表达，在 NMDA 或 Glu 处理前加用 影响呈时间依赖性（图4C）。
LOV 或 APV 预处理，NR2B 的表达增加（图 3）。接
着 使 用 蛋 白 免 疫 印 迹 检 测 LOV 对 NMDA 受 体 Vehicle LOV+NMDA APV+Glu LOV+Glu
（NR1 和 NR2B）和 GluR2 的影响。结果显示，与未 NMDA LOV Glu
处理组相比，NMDA 处理显著抑制 NR2B 蛋白表达 NR2B 160 kDa
（P < 0.001），LOV 预处理后能够增加 NR2B 表达
β⁃actin 35 kDa
（P < 0.05，图 4A~B）。生物素化法检测细胞表面受
体的表达，结果显示，NMDA 处理导致细胞表面大 图3 蛋白免疫印迹检测各组NR2B蛋白表达
部分 NR2B 丢失（P < 0.001），而不改变细胞表面 Figure3 NR2Bexpressionanalyzedbyimmunoblotanalysis

A 总体水平 细胞表面分布 B
NMDA - + - + - + - +
LOV - - + + - - + +
1.4 *
* Vehicle
NR1 120 kDa 1.2 *** NMDA
***
1.0 LOV
NR2B水平 0.6
NR2B 160 kDa 0.8 LOV+NMDA
GluR2 95 kDa 0.4
0.2
β⁃actin 35 kDa 0
总NR2B 细胞表面NR2B
C NMDA 0 5 10 15 30 （min）

NR2B 160 kDa

β⁃actin 35 kDa

A：不同受体亚基NR1、NR2B和GluR2的总分布和细胞表面分布的代表性免疫印迹图像；B：各组总NR2B及细胞表面NR2B水平的定量比
较；两组比较，P < 0.05， P < 0.001（n=3）；C：蛋白免疫印迹结果显示NMDA处理不同时间后NR2B的表达。
***
*
图4 蛋白免疫印迹法和生物素化法检测NMDA受体亚单位总的蛋白水平和细胞表面分布
Figure 4 Measurement of total level and surface distribution of NMDA receptor subunits by immunoblot analysis and bioti⁃
nylation assay