Page 34 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第4期
·472 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年4月

2.3 LOV 通 过 调 节 Tyr1472 位 点 的 磷 酸 化 影 响 酸化与其表面分布有关。为了验证 LOV 神经保护
NR2B的表面分布 机制，我们进行相应研究。结果显示，NMDA 处理
随后，我们应用蛋白合成抑制剂 100 μmol/L 环 后，NR2B 在Tyr1472位点的磷酸化下降（P < 0.05），
己酰胺抑制 NR2B 的合成，以观察 LOV 是否能影响 LOV 预处理显著恢复 Tyr1472 位点的磷酸化（P <
NR2B 的降解。研究结果显示，在 NMDA 处理后， 0.05）；使用NMDA处理后，NR2B 也降低Tyr1336位
NR2B 迅速减少，LOV 预处理能阻止 NR2B 的降解 点的磷酸化（P < 0.05），但 LOV 预处理不能恢复
（图 5A）。由于 NR2B 的磷酸化与 NR 的功能定位 Tyr1336 位点的磷酸化（图 5B~C），提示 LOV 很可能
和内吞密切相关，并且 NR2B 在 Tyr1472 位点去磷 通过Tyr1472位点的磷酸化影响NR2B的表面分布。

A NMDA - + + + + + + B Vehicle NMDA LOV LOV+NMDA
LOV - - - - + + +
p⁃NR2B
CHX 0 0 30 60 0 30 60 min （Tyr1472） 180 kDa
NR2B 160 kDa
p⁃NR2B 164 kDa
（Tyr1336）
β⁃actin 35 kDa
160 kDa
NR2B
C * Vehicle
1.2 * * β⁃actin 35 kDa
NMDA
磷酸化NR2B水平 0.8 LOV+NMDA
1.0
LOV
0.6
0.4
0.2
0
p⁃NR2B（Tyr1472） p⁃NR2B（Tyr1336）
A：加入蛋白合成抑制剂100 μmol/L环己酰胺不同时间下，观察加入NMDA和洛伐他汀后NR2B的蛋白表达；B：洛伐他汀对NR2B不同磷
酸化位点的影响；C：洛伐他汀对NR2B不同磷酸化位点的影响比较；两组比较，P < 0.05（n=3）。
*
图5 蛋白免疫印迹法检测各组NR2B蛋白水平及磷酸化
Figure 5 NR2B and its phosphorylation were by immunoblot analysis

成分 ［6，21］ 。本研究显示，NMDA 导致 NR2B 表达下
3 讨 论
降，而且，随着 NMDA 处理时间的延长，NR2B 的表
由于兴奋性毒性损害在急性脑卒中和慢性神 达逐渐下降直至丢失，LOV 可显著缓解NMDA 引起
经退行性疾病中的重要作用 ［16-17］ ，减轻兴奋性毒性 的NR2B表达下降，提示LOV很可能通过调节NR2B
损害成为神经保护的基本策略。本研究应用NMDA 发挥神经保护作用。
诱导大鼠皮质神经元的兴奋性毒性损害，发现LOV 既往研究 ［18］ 表明，辛伐他汀通过上调NMDA 受
对NMDA诱导的兴奋性毒性损害有神经保护作用。 体亚单位NR2B的表面分布来增强NMDA介导的突
他汀类药物，尤其是辛伐他汀和 LOV，表现出 触传递，改善海马依赖的空间记忆，挽救阿尔茨海
兴奋毒性保护和记忆挽救作用 ［12-13，18-20］ 。然而，其中 默病小鼠模型的记忆缺陷。跟大多数膜蛋白一样，
的机制尚不清楚。NMDA受体是一种配体门控离子 NR 的细胞表面定位与富含胆固醇的脂筏有关 ［22］ 。
型 Glu 受体，在中枢神经系统信号传递以及神经系 他汀能显著减少脂筏介导的大量膜蛋白的内吞 ［23-24］ 。
统的可塑性方面具有重要的作用。NR2 亚单位决 本 研 究 表 明 NMDA 处 理 不 改 变 细 胞 表 面 NR1、
定了NR的突触定位和功能，一般认为NR2A与突触 Glu2R 的蛋白水平，而是选择性地导致细胞表面大
活性相关，NR2B 与突触外活性相关。最近的研究 部分 NR2B 丢失，LOV 预处理能显著减少 NMDA 诱
表明突触 NR2A 通常与细胞存活有密切的联系，而 导的细胞表面 NR2B 丢失，提示 LOV 的神经保护与
突触外NR2B与细胞死亡信号有关 ，并且NR2B被 NR2B 的细胞表面分布有关。结合本课题组先前的
［5］
认为是导致脑缺血后神经元兴奋性损伤的最主要 研究，他汀预处理 3~5 d，而不是 1 d，对大鼠皮质神