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第43卷第5期
               ·734 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年5月


              开始表达。该团队观察到stage f0至原始SSCs的转                      包 括 SSC ⁃ 1：GFRA1 UTF1 （基 因 标 志 物 ：PI⁃
                                                                                          high
                                                                                   low
              变是SSCs基因标志物表达的持续升高，而不是大量                          WIL4）；SSC ⁃ 2：GFRA1   high  UTF1 （基 因 标 志 物 ：
                                                                                             low
              新基因的出现，这提示该转变过程可能是 PGCs 分                         ASB9、LITD1），后期Guo等 单细胞测序工作中鉴定
                                                                                        ［8］
              化至SSCs 的过渡阶段。进一步，通过免疫染色实验                         发现的SSCs亚群stage 0、1阶段，与其表达模式类似。
              证明，在胚胎至胎儿阶段，NANOG（PGCs 基因标志                            Guo 等 通过 scRNA⁃seq 对未分化精原细胞簇
                                                                          ［8］
              物）和MKI67（增殖基因标志物）表达降低；在早期胎                        进行聚类分析，发现一种更早期阶段细胞亚群，将
              儿期，PIWIL4（SSCs基因标志物）被检测出。                         其与婴儿生殖细胞转录组进行比较，发现有很大共
                  以上表明，PGCs 至原始 SSCs 的转变可能发生                    性。同时，拟时序分析结果表明该亚群与婴儿生殖
              于早期胎儿阶段，涉及类多能性、增殖活性等生物                            细胞位置相邻，均位于发育轨迹的起始，提示该精
              学功能的抑制，以及 SSCs 基因标志物的表达上调，                        原细胞亚群可能是最原始 SSCs（stage 0 阶段）。其
              提示在婴儿乃至胎儿阶段，原始 SSCs 雏形逐步形                         中，stage 0 阶段特异表达 PIWIL4、EGR4、TSPAN33、
              成。同时，鉴定发现特异表达于 PGCs 阶段基因标                         PHGDH、PPP1R36、ICA1L等，早期已鉴定SSCs基因
              志物，包括 ETV4、PIM2、POU5F1、PHLDA3、PDPN、               标志物ID4、FGFR3、TCF3 和 UTF1在stage 0、1阶段
              ITM2C、RNPEP 和THY1，stage f0（SSCs前阶段）基因             均表达。通过免疫荧光染色，发现 PIWIL4、PHG⁃

              标志物，包括 RHOXF1、STK31、CSRP2、ASZ1、SIX1               DH、SLC25A22、ICA1L、PPP1R36、MAGEB1、EGR4、
              和 THRA。该组基因可能在人 PGCs 向原始 SSCs 转                   MSL3、TSPAN33 特异表达于 stage 0 阶段，GFRA1、
              化过程中，如 SSCs 基因标志物的表达调控、多能性                        ETV5、L1TD1 特异表达于 stage 1 阶段，KIT、MKI67
              抑制等方面起到重要作用，需进一步实验探讨其作                            特异表达于 stage 2 阶段及分化精原细胞，而 UTF1、
              用机制。                                              FGFR3和TCF3在三阶段均表达。
                                                                     Sohni等 通过scRNA⁃seq分析发现2种SSCs亚
                                                                           ［6］
              2 基于scRNA⁃seq揭示人SSCs亚型及其基因标志物
                                                                群，包括早期SSCs（SSC⁃1）及晚期SSCs（SSC⁃2）。分
                  基于形态学分析，传统观点认为人精原细胞包                          析过程中发现 SSC⁃1 亚群内部存在异质性，对其进
              括A pale（Ap）、A dark（Ad）、B型精原细胞        ［10］ 。Ap和    行进一步聚类分析，鉴定发现出3个子亚群，将其命
              Ad 型精原细胞代表人 SSCs 的不同阶段，Ad 型 SSCs                  名为 SSC⁃1A、SSC⁃1B 和 SSC⁃1C。拟时序分析揭示
              相对静止，Ap型SSCs相对活跃，Ad型精原细胞可进                        其发育轨迹：SSC⁃1B→SSC⁃1A、SSC⁃1C→SSC⁃2，这
              行自我更新或分化为Ap型精原细胞，后者可分化产                           提示 SSC⁃1B 可能是原始 SSCs。对各阶段基因标志
              生 B 型精原细胞      ［11-12］ 。然而，仅依赖形态学方法描              物进行鉴定，SSC⁃1A 中包括 A2M、ENO3；SSC⁃1B 中
              述人SSCs 是不准确的，有研究使用PAS 染色法（pe⁃                     包 括 C19orf84、EGR4、FSD1；SSC ⁃ 1C 中 包 括 NA⁃
              riodic acid⁃Schiff stain，PAS）、苏木精伊红染色（he⁃         NOS2；SSC⁃2中包括ID4、GFRA1、NANOS3。进一步
              matoxylin⁃eosin staining，HE）及免疫组织化学（im⁃           通过免疫染色验证 EGR4、FSD1、LPPR3、PIWIL4 和
              munohistochemistry，IHC）染色结合scRNA⁃seq数据，           TSPAN33 可作为原始 SSCs（SSC⁃1B）的新型基因标
              发现部分 Ap 与 Ad 型精原细胞转录组水平结果相                        志物，与已知 SSCs 基因标志物 UTF1、GFRA1 共染，
              似，提示两者可能为同一细胞类型                 ［13］ 。因此，需要       比较发现 LPPR3、PIWIL4 较 UTF1 可作为原始 SSCs
              更精细、准确的方法鉴定、描述人SSCs亚型。                            更特异的基因标志物。同时，利用荧光激活细胞分
                  目前基于 scRNA⁃seq 技术，结合已报道精原细                    离技术（fluorescence⁃activatedcell sorting，FACS），发
              胞基因标志物，鉴定出4种精原细胞亚型，包括早期                           现膜蛋白编码基因 LPPR3 和 TSPAN33 标记志更局
              未分化精原细胞（相对静止、SSC⁃1）、晚期未分化精                        限的睾丸细胞群，表明其作为原始SSCs基因标志物
              原细胞（相对活跃、SSC⁃2）、分化中精原细胞（早期分                       的可行性。在Persio等        ［17］ 单细胞测序工作中鉴定类
              化精原细胞）、分化精原细胞            ［6，8，13-15］ 。            似的SSCs亚群，包括stage 0阶段（PIWIL4、PHDGH、
                  Wang 等 ［16］ 对 scRNA⁃seq 分析获得的 SSCs 亚群         EGR4）；stage 0A 阶段（UTF1、SERPINE2、FGFR3）；
              进 行 研 究 时 ，发 现 NANOS2、ZBTB16、SALL4、               stage 0B（NANOS2）；stage 1 阶段（GFRA1、GFRA2、
              POU3F1、UTF1、NANOS3 高表达于该亚群。进一步                    NANOS3、ID4），其发育轨迹为 stage 0→stage 0A、
              分析该 SSCs 亚群，发现内部存在异质性，对该亚群                        stage 0B→stage 1。
              进行降维处理，鉴定出 2 种不同的 SSCs 表达模式，                           综上所述，目前 scRNA⁃seq 研究中鉴定出 4 种
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