Page 83 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第5期 赫义君，盛云露，夏 凡，等. 高脂饮食通过小肠上皮组织外泌体促进心脏纤维化［J］.
2023年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（5）：663-668 ·665 ·

表1 PCR引物序列
Table 1 PCR primer sequences
基因名 引物序列（5′→ 3′） 基因名 引物序列（5′→ 3′）
β⁃actin F：TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT MMP⁃9 F：CCACCACCACAACTGAACCAC
R：CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC R：ACCAACCGTCCTTGAAGAAATG
TGF⁃β F：CAACAATTCCTGGCGTTACCT LOX F：CGTCCACGTACGTGCAGAAG
R：GCCCTGTATTCCGTCTCCTT R：CCTGTATGCTGTACTGGCCAGAC
ACTA2 F：AAAAGACAGCTACGTGGGTGA TNF⁃α F：CCCTCACACTCACAAACCACC
R：GCCATGTTCTATCGGGTACTTC R：CTTTGAGATCCATGCCGTTG
Col1a1 F：GCAACATCTCCCCTTCGTT IL⁃1β F：GCATCCAGCTTCAAATCTCGC
R：TCCGATGTTTCTGCTTTGTCGT R：TGTTCATCTCGGAGCCTGTAGTG
Col3a1 F：TTGAAGGAGGATGTTCCCATCT IL⁃6 F：CCCCAATTTCCAATGCTCTCC
R：ACAGACACATATTTGGCATGGTT R：CGCACTAGGTTTGCCGAGTA
FN1 F：CGTCATTGCCCTGAAGAACA F4/80 F：ATGGACAAACCAACTTTCAAGGC
R：AAGGGTAACCAGTTGGGGAA R：GCAGACTGAGTTAGGACCACAA
FGF2 F：AGAAGAGCGACCCTCACATCA MKI67 F：CCACATGGATTTCTGAAC
R：CGGTTAGCACACACTCCTTTG R：GCCATCACACAACAGTAG
Postn F：CCATTGGAGGCAAACAACTCC CDK1 F：TAGCATCAGATGCACGC
R：TTGCTTCCTCTCACCATGCA R：GTGTCCAGCAGTCGCACTAT
MMP⁃2 F：GCCATCAGCGTTCCCATACTT CCNB1 F：CATGGTGCACTTTCCTCCTT
R：GACCCTGAAACCGTGGATGAT R：AGGTAATGTTGTAGAGTTGGTGTCC

以均数±标准差（x ± s）表示，采用t 检验进行两组比 α⁃SMA 蛋白是肌成纤维细胞的标志，为了进一
较。P ＜0.05为差异有统计学意义。 步证明 HFD 小鼠小肠上皮组织外泌体促进心脏成
纤维细胞分化，利用免疫荧光染色的方法，分别对
2 结 果
NCD组及HFD组进行染色，比较两组间相对荧光强
2.1 心脏成纤维细胞摄取小肠上皮组织外泌体 度，发现HFD组α⁃SMA、Col3a1蛋白表达水平显著高
为了证实心脏成纤维细胞能够摄取小肠上皮 于NCD组，Col1a1蛋白表达水平有升高趋势（图3）。
组织外泌体，提取了正常饮食/HFD小鼠小肠上皮组
3 讨 论
织外泌体与原代心脏成纤维细胞共培养，利用
PKH26示踪的方法，观察外泌体被心脏成纤维细胞 HFD会导致心脏结构和功能发生不良重构，但
摄取情况。结果发现，两种小肠上皮组织外泌体均 其潜在机制一直难以明确 。心脏不良重构主要是
［7］
可被心脏成纤维细胞摄取，且二者摄取效率无差异 由心肌细胞、成纤维细胞功能异常所导致，在正常
（图1）。 心脏中，心脏成纤维细胞通过产生与降解细胞外基
2.2 心脏成纤维细胞接受小肠上皮组织外泌体刺 质，维持心脏结构稳态及正常功能。而当心脏受到
激后的功能改变 损伤，如发生急性心肌梗死时，心肌细胞大量死亡，
为探究HFD对心脏成纤维细胞纤维化相关基因 免疫细胞清除凋亡坏死的心肌细胞并分泌促炎症
的影响，我们分别对与高脂/正常饮食小鼠小肠上皮 因子，使静息的成纤维细胞活化增殖成为肌成纤维
［8］
组织外泌体共培养48 h的心脏成纤维细胞纤维化相 细胞 。肌成纤维细胞特异性地表达α⁃SMA，同时
关基因进行分析。结果显示，HFD组与增殖（MKI67、 分泌更多Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原 ，构建新的细胞外
［9］
CDK1、CCNB1）、向肌成纤维细细胞分化（TGF⁃β、AC⁃ 基质以填补死亡细胞丢失留下的空洞，有助于保持
TA2）、细胞外基质组分合成（Col1a1、Col3a1）、修饰细 心脏结构的完整性 ［10］ ，其合成细胞外基质的能力远
胞外基质（MMP2、MMP9）、炎症因子（IL⁃1β、IL⁃6、 大于成纤维细胞，是心脏纤维化过程中细胞外基质
TNF⁃α）水平等相关基因水平高于NCD组（图2）。以 的主要来源。
上结果说明HFD鼠小肠上皮组织外泌体可以作用于 研究已证实 HFD 后脂肪组织可以通过脂肪因
心脏成纤维细胞可以促进其纤维化相关基因表达。 子、炎症因子、外泌体等方式诱导心肌肥厚、心脏纤