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第43卷第5期 陈 露，唐诗佳，钟彩英，等. 氧化微环境中普鲁士蓝纳米酶促进MC3T3⁃E1细胞成骨分化［J］.
2023年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（5）：669-677 ·673 ·

A B C D
20 μg/mL
50 μg/mL
250 μg/mL 120
E F 250 000 G H （ % ） 100
2.0 200 000 （ % ） 20 80
Absorbance 1.5 Total Counts 150 000 Intensity 15 Transmittance 60 3 443 2 086
1 639
40
1.0
10
100 000
20
0.5
0
0.0 50 000 0 5 0 4 000 3 500 3 000 2 500 2 000 1 500 1 000
400 500 600 700 800 -100 -50 0 50 100 10 100 1 000
波长（nm） Apparent Zeta Potential（mV） Size（d.nm） Wavenumber（cn ）
-1
A：透射电镜观察PB形态（×300 000）；B：高分辨率透射电镜观察PB结晶度（标尺：2 nm）；C：扫描电镜观察PB形态和表面形貌（×500 000）；
D：透射电镜观察PB的胞吞情况（×20 000，红色箭头即为PB所在位置）；E：PB的紫外吸收光谱图；F、G：纳米粒度及Zeta电位分析仪分析PB的
表面电荷（F）、水动力尺寸（G）；H：傅里叶红外光谱仪测量PB分子结构。
图1 PB的表征
Figure 1 Characterizations of PB nanozyme
A B 4 4 4
0 μg/mL 50 μg/mL 10 10 10
1.15 0.10 1.83 0.21 1.72 0.36
10 μg/mL 100 μg/mL
125 20 μg/mL 150 μg/mL 10 3 10 3 10 3
（ % ） 100 10 2 10 2 10 2
细胞活力 50 * * 10 1 96.5 2.26 10 1 96.3 1.65 10 1 91.0 6.94
75
25
0 10 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
24 h 48 h 0 μg/mL 10 μg/mL 20 μg/mL
PI 10 4 10 4 10 4
5.98 0.96 1.28 1.06 0.78 2.51
10 3 10 3 10 3
10 2 10 2 10 2
10 1 10 1 10 1
90.6 2.60 84.7 12.9 76.0 20.7
10 0 10 0 10 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
50 μg/mL 100 μg/mL 150 μg/mL
FITC⁃Annexin V
A：CCK⁃8 检测不同浓度 PB 对 MC3T3⁃E1 细胞增殖的影响；B：流式细胞仪检测不同浓度 PB 对 MC3T3⁃E1 细胞凋亡的影响（24 h）。与
0 μmol/L比较，P < 0.001（n=3）。
*
图2 PB的生物相容性
Figure 2 Biocompatibility of PB nanozyme

的超氧阴离子来定量 PB 的超氧化物清除活性。与 倒置荧光显微镜下观察细胞内ROS水平，FTIR荧光
H2O2降解类似，PB的超氧物清除能力也呈剂量和时 越强，代表细胞内 ROS 水平越高。可以看到，正常

间依赖性（图3B），并且20 μg/mL PB在作用120 min MC3T3⁃E1活细胞内的ROS水平很低，加入Rosup阳
时，也有超过 50%的超氧化物被清除。因此，之后 性刺激的组，FITC 荧光强度显著增强，即细胞内
的抗氧化成骨实验，采取20 μg/mL 浓度的PB进行。 ROS 水平显著提高。而加入20 μg/mL PB 不会使细
2.3.2 PB对细胞内ROS的清除活性 胞内的 ROS 出现显著上升，相反，PB 的存在可以使
使用DCFH⁃DA 荧光探针标记MC3T3⁃E1细胞， 受到阳性刺激的MC3T3⁃E1细胞内的ROS水平降低