Page 98 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第5期
·680 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年5月

至 105.6 ± 10.3（P < 0.01），而 25.0 μmol/L RES 预
GRP 78 78 kDa
处理后，PC12细胞Fluo⁃3荧光值为74.2 ± 7.2，显著低
β⁃actin 42 kDa
于 TG 组（P < 0.01）。上述结果表明，ERS 引起 PC12
细胞［Ca ］ i升高，而RES抑制ERS诱导的钙超载。
2+
4
2.3 RES 对 ERS 诱导 Caspase⁃3 活化的影响以及钙
# 超载在其中的作用
3
GRP78/β⁃actin 2 *# 如图 3A 所示，TG 处理使 PC12 细胞 D（405 nm）
#
1 由对照组的 0.074 ± 0.012 上升至 0.199 ± 0.072（P <
0.01），RES+TG 、DEVD⁃CHO（阴 性 对 照）+TG 组
0 D（405 nm）分别为 0.129 ± 0.024、0.085 ± 0.027，显
对照组 TG组 著低于TG组（P < 0.01）。这些结果表明ERS可激活
12.5 μmol/L RES+TG组 Caspase⁃3，而RES可以减轻ERS对Caspase⁃3的激活。
25.0 μmol/L RES+TG组

与TG组比较，P < 0.05；与对照组比较，P < 0.05（n=3）。 为明确钙超载在ERS诱导Caspase⁃3活性升高中
*
#
的作用，在ERS处理之前采用BAPTA（一种Ca 螯合
2+
图1 RES抑制ERS诱导PC12细胞GRP 78的过度表达 剂）预处理PC12细胞30 min，结果发现D（405 nm）值
Figure 1 RES inhibited GRP 78 overexpression induced
by ERS in PC12 cells 由 TG 组 的 0.234 ± 0.043 降 至 0.137 ± 0.029（P <
0.01），但仍高于对照组的0.067 ± 0.018（P < 0.01，图
用 Ca 荧光探针 Fluo⁃3 和共聚焦系统检测 PC12 细 3B）。结合前面的结果，提示 RES 通过抑制 ERS 诱
2+
胞 Fluo⁃3 荧光值以表示［Ca ］ i （图 2）。为评估此系 导的钙超载减轻Caspase⁃3的激活。
2+
统能否检测出［Ca ］ i的变化，采用离子霉素（一种 2.4 RES 对 ERS 诱导神经细胞凋亡的影响及钙超
2+
Ca 载体）作为阳性对照，结果显示离子霉素处理 载在其中的作用
2+
后，PC12 细胞［Ca ］ i显著升高，表明采用的系统能 为了研究 RES 对 ERS 诱导神经细胞凋亡的影
2+
检测出［Ca ］ i 的变化。400 nmol/L TG 处理 24 h， 响，采用流式细胞术检测细胞凋亡率。TG 使 PC12
2 +
PC12细胞Fluo⁃3荧光值由对照组的48.8 ± 5.8 上升 细 胞 凋 亡 率 由 对 照 组 的（1.31 ± 2.23）% 升 高 至
对照组 RES组 TG组 25.0 μmol/L RES+TG组 离子霉素组

180 #

Fluo⁃3荧光值 120 # *

60

0
对照组 RES组 TG组 离子霉素组
25.0 μmol/L RES+TG组

与TG组比较，P < 0.01；与对照组比较，P < 0.01（n=4）。
#
*
图2 RES对内质网应激诱导［Ca ］ i变化的影响（×630）
2+
2+
Figure 2 The effects of RES on the change of［Ca ］ i induced by ERS（×630）