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第43卷第5期             李玮琪，马永洁，黄新惠，等. 莱菔硫烷对ox⁃LDL诱导血小板活化的抑制作用［J］.
                  2023年5月                     南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（5）：684-690                        ·685 ·


                    近年来，心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）         内动物实验中发现，SFN 可以显著抑制脂多糖诱导
                已经成为威胁我国人民健康的主要问题和突出的                             的小鼠血小板聚集反应以及脑微循环血栓的形
                公共卫生问题       ［1-2］ 。诱发 CVD 的危险因素很多，其              成。但是，SFN 对ox⁃LDL诱导血小板活化的作用及
                中高脂血症一直受到高度认可与关注，被普遍认为                            其可能的分子机制尚不清楚，本研究旨在体外实验
                是引起 CVD 最重要的危险因素之一。高脂血症的                          中探讨 SFN 对 ox⁃LDL 诱导血小板活化的影响及其
                发生发展涉及错综复杂的病理机制，大量报道证明                            可能的分子机制，为 SFN防治高脂血症中血栓形成
                了血小板在高脂血症中起着重要的作用，由高脂血                            提供新靶点和重要理论依据。
                症导致的血小板活化是高脂血症引起各种心脑血
                                                                  1  材料和方法
                                                       ［3］
                管并发症（如血栓等）的重要病理生理基础 。在
                高脂血症患者的循环血液中，氧化低密度脂蛋白                             1.1  材料
               （oxidized low⁃density lipoprotein，ox⁃LDL）异常增高          FITC 标记抗人 CD62P 抗体、PF4 和 CCL5 检测
                是诱导血小板高度活化的主要因素                 ［3-4］ 。ox⁃LDL 通   试剂盒（eBioscience 公司，美国）；SFN、N⁃乙酰半胱
                过与血小板表面清道夫受体 CD36 分子结合，可触                         氨酸（NAC）（Sigma⁃Aldrich 公司，美国）；oxLDL（广
                发一系列胞内信号转导事件，促进血小板活化，如                            州 奕 源 生 物 科 技 有 限 公 司）；一 抗 phospho ⁃ Src
                可使血小板表面表达大量的分子标志物（包括                             （Tyr ）（武汉爱博泰克生物科技有限公司）；phospho⁃
                                                                      416
                CD62P 和 CD63 等）以及释放 PF4 和 CCL5 等可溶性               Syk（Tyr ）、GAPDH 以 及 二 抗 羊 抗 兔（Affinity
                                                                          323
                蛋白，最终导致血小板连接在一起形成聚集体，参                            Bioscience 公司，美国）；Src的家族激酶抑制剂PP2、
                与动脉粥样硬化和血栓的形成和发展                 ［3，5］ 。          Src 的家族激酶激动剂 MLR⁃1023（Selleck Chemical
                    ox⁃LDL 诱导高脂血症中血小板活化的分子机                       公司，美国）；活性氧（reactive oxygen species，ROS）
                制是错综复杂的，其中酪氨酸家族蛋白酶的活化是                            检测试剂盒（Abcam公司，英国）。
                重要的机制之一       ［5-6］ 。ox⁃LDL可通过CD36激活胞内                CytoFlex 流式细胞仪（Beckman Coulter 公司，美
                酪氨酸蛋白酶，其中肉瘤酪氨酸激酶（sarcoma tyro⁃                    国）；低温高速离心机（H1650R）、低速离心机（L400）
                sine kinase，Src）是受ox⁃LDL调控的最重要的酪氨酸               （湖南湘仪实验仪器开发有限公司）；低温冰箱（BCD⁃
                激酶，ox⁃LDL 可使其发生磷酸化，进而促使其下游                        4.8.5WGHTDD9DYU1，青岛海尔有限公司）。
                的脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase，Syk）和蛋白            1.2  方法
                激酶 C（protein kinase C，PKC）等蛋白发生磷酸化，               1.2.1 研究对象的招募
                使得胞内总ROS增加，最终诱发血小板发生活化和                               12例符合条件的健康志愿者（年龄25~40岁）在
                血栓的形成发展 。抑制高脂血症中血小板活化已                            大理大学校内招募。所有志愿者均自愿参与该项
                              ［6］
                                                 ［7］
                经成为防治血栓形成的重要途径之一 。                                目，并均已签署书面知情同意书。志愿者若出现以
                    大量的研究证实，营养干预是预防心血管疾病的                         下至少一种情况将给予排除：滥用药物（如头孢菌素
                重要途径之一      ［8-10］ 。莱菔硫烷（sulforaphane，SFN），又      类和青霉素类抗菌药和核苷类抗病毒药物等）、酗酒、
                被称为萝卜硫素，属于异硫氰酸盐类植物化学物，                            吸烟半年以上；现在或曾经患有恶性肿瘤、CVD、免疫
                在十字花科蔬菜如西兰花、白花菜、卷心菜、甘蓝和                           缺陷病等病史；近半年内服用辅酶Q10、维生素等具
                萝卜等中含量十分丰富           ［11-12］ 。SFN具有多种生物活          有显著改善血小板功能的膳食营养补充剂；在 2 周
                性作用，包括抗肿瘤、抗氧化、抗炎、代谢解毒以及                           内服用抗血小板的药物（如αⅡbβ3 受体抑制剂、
                免疫调节等     ［13-14］ 。近年来，SFN 在防治心血管疾病               磷酸二酯酶抑制剂、阿司匹林和 P2Y12受体拮抗剂
                                                                     ［22-23］
                领域也越来越受关注，大量的流行病学、临床试验                            等）     。本研究完全按照《赫尔辛基宣言》相关准则
                和动物实验研究表明，SFN 通过抗炎、抗氧化、改善                         进行，并已通过大理大学伦理委员会的批准。
                内皮细胞功能以及改善糖脂代谢紊乱等机制发挥                             1.2.2 健康人血样及纯化血小板的制备过程
                保护心血管的作用        ［15-17］ 。在调控血小板功能方面，有                 将抽取的 15 mL 肘静脉全血注入含 3.2% 的枸
                研究发现SFN可以有效抑制生理性激动剂（如胶原、                          橼酸钠真空抗凝管中（1/9，V/V），静置 10 min 后，在
                二磷酸腺苷）诱导的健康人血小板聚集反应                  ［18-19］ ；SFN  22 ℃、150 g全血离心20 min，小心吸取最上层3/4的
                还可以抑制胶原诱导的血小板整合素αⅡbβ3 的活                          血浆，即为富血小板血浆（platelet⁃rich plasma，PRP）。
                化和血栓素 A2的释放        ［20］ 。另外，Gillespie 等 ［21］ 在体   用枸橼酸葡萄糖溶液（含 75 mmol/L 柠檬酸钠、
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