Page 7 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期 南京医科大学学报（自然科学版）
2023年6月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·749 ·

·基础研究·

利用shRNA慢病毒高效敲降雄性小鼠睾丸基因

龚 洁，卜治文，徐 晨，叶 岚 ，谢 婕 *
*
南京医科大学生殖医学国家重点实验室，江苏 南京 211166

［摘 要］ 目的：建立快速、高效制备小鼠睾丸基因敲降的平台。方法：设计和构建靶向睾丸特异性表达基因Sox30转录本的
shRNA 表达载体（pSliencer⁃GFP⁃shSox30）及其对照质粒（pSliencer⁃GFP⁃shScramble），与慢病毒颗粒包装后通过网微注射转导
至出生24 d小鼠睾丸生精小管管腔，利用免疫荧光等检测慢病毒敲降鼠体内靶向基因的效率及敲降Sox30后对生殖细胞发育
的影响。结果：慢病毒处理敲降后，相比对照组小鼠，shSox30病毒敲降组小鼠睾丸组织中Sox30蛋白表达水平显著下调，生精
管腔中圆形精子发育阻滞在2~3步，Ⅶ~Ⅷ期生精管腔中无长型精子。结论：shRNA慢病毒有效降低小鼠睾丸靶基因的表达水
平，在制备睾丸特定基因敲降动物模型中具有巨大优势。
［关键词］ RNA干扰；动物模型；Sox30；小鼠；睾丸
［中图分类号］ R394.33 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2023）06⁃749⁃07
doi：10.7655/NYDXBNS20230601

Application of shRNA⁃mediated lentivirus for knockdown of endogenous genes in mouse
testis

*
GONG Jie，BU Zhiwen，XU Chen，YE Lan ，XIE Jie *
State Key Laboratory of Reproductive Medicine，Nanjing Medical University，Nanjing 211166，China

［Abstract］ Objective：The current study aims to establish an efficient and fast method for in vivo knockdown of endogenous genes in
mouse testis. Methods：Lentiviral vector（pSliencer⁃GFP⁃shSox30）along with the control vector（pSliencer⁃GFP⁃shScramble）were
designed and constructed. These lentiviral particles were microinjected into the mouse testis at postnatal day 24. Immunofluorescence
and histological analysis was performed to evaluate the functional consequences in mouse testis upon Sox30 knockdown. Results：After
the shSox30 lentiviral particles treatment，Sox30 protein was substantially decreased in mouse testis. Immunofluorescence of testis
sections revealed that many spermatids were arrested at step 2⁃3. Histological examination of testis sections revealed that elongated
spermatids were absent in seminiferous tubules at stage Ⅶ⁃Ⅷ. Conclusion：The shRNA⁃mediated lentivirus effectively decreases the
expression level of target genes in mouse testis，providing a useful platform to knockdown endogenous genes in vivo.
［Key words］ RNAi；animal model；Sox30；mouse；testis
［J Nanjing Med Univ，2023，43（06）：749⁃755］

小鼠的精子发生是一个高度复杂且有序的过 研究者建立相关基因的基因敲除动物模型。近年
程，涉及多个与精子发生相关的基因 ［1-3］ 。不同的精 来 ，有 研 究 者 基 于 RNA 干 扰（RNA interference，
子发生相关基因在不同的时间窗内准确而有序地 RNAi）现象开发基因敲减平台，通过构建 pSliencer⁃
表达是精子发生成功的必要条件。为了更好地研 GFP⁃shRNA 表达载体，并递送至小鼠睾丸内，成功
究这些基因在精子发生过程中发挥何种功能，需要 敲降目的基因的表达 。
［4］
RNAi 是指小干扰 RNA（small interfering RNA，
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（31871503，32070843，
siRNA）诱发导致的同源mRNA高效特异性降解，从
2022YFC2703501）
［5］
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：jiexie@njmu.edu.cn；
∗ 而引起基因表达沉默的现象 。siRNA结合至RNA
lanye@njmu.edu.cn 诱导的沉默复合物（RNA⁃induced silencing complex，