Page 12 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期
·754 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年6月

A 1.5 对照组 C D
mRNA相对表达量 1.0 ** * mRNA相对表达量 1.5 mRNA相对表达量 1.5
实验组
1.0
1.0

Sox30 0.5 Sox5 0.5 Sox6 0.5
0 0 0
48 h 7 d 对照组 实验组 对照组 实验组

B E
48 h 7 d 对照组 实验组
对照组 实验组 对照组 实验组 45 kDa
Sox5
Sox30 100 kDa 110 kDa
Sox6
75 kDa
β⁃Actin 42 kDa β⁃Actin 42 kDa
A：RT⁃qPCR检测感染48 h和7 d后睾丸中Sox30 mRNA水平（两组比较，P < 0.05，P < 0.01，n=3）；B：Western blot检测感染48 h和7 d后睾
**
*
丸中Sox30蛋白表达水平；C、D：RT⁃qPCR检测感染48 h后睾丸中Sox家族同源基因Sox5（C）和Sox6（D）mRNA水平（n=3）；E：Western blot检测
感染48 h后睾丸中Sox家族同源蛋白表达水平。对照组为注射shScramble，实验组为注射shSox30。
图3 Sox30敲降小鼠睾丸mRNA和蛋白表达水平
Figure 3 The expression of mRNA and protein level from mouse testis treated with shSox30 lentivirus

A
~Ⅰ Ⅱ~Ⅲ Ⅳ~Ⅵ Ⅶ~Ⅷ

Zyg RS MI Ser Pac RS Pac RS Pac PL RS
B C
对照组 实验组 对照组 实验组

ES
RS
RS
Step 4⁃6 Step 11⁃12 Rac
Step 2⁃3
Step 2⁃3
Rac
Rac RS

A：荧光显微镜观察睾丸组织中 shRNA 感染的细胞类型，标尺为 20 μm（×200）；B：PNA 染色观察圆形精子发育情况，标尺为 20 μm
（×200）。PNA红色信号为圆形精子顶体蛋白，DAPI蓝色信号为细胞核组份。C：伊红⁃苏木素染色观察睾丸组织整体发育情况，标尺为20 μm
（×200）。Ser为支持细胞，PL为前细线期精母细胞，Zyg为偶线期精母细胞，Pac为粗线期精母细胞，RS为圆形精子细胞，MI为减数第一次分裂
中期细胞。对照组为注射shScramble，实验组为注射shSox30。
图4 Sox30敲降雄鼠生殖表型分析
Figure 4 Analysis of the reproductive phenotype of male mice with Sox30 knockdown

早阶段就敲除了目的基因而导致精子发生阻滞在 降载体注射进入小鼠睾丸生精管腔中，从而可以达
早期阶段，导致无法研究这一基因在精子发生晚期 到在特定时间点完成目的基因的敲降工作。传统
阶段的表型和功能。借助本平台可以根据实验需 的基因敲除模型通过CRISPR/Cas9等基因编辑技术
要，在第一波生精波发生的相应时间点将慢病毒敲 进行基因打靶工作，但是此技术存在脱靶效应。同