Page 17 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期 江婧月，张红杰. 羟氯喹抑制MEK/ERK/ROS通路减少中性粒细胞胞外诱捕网形成改善葡聚糖硫酸钠
2023年6月 诱导的小鼠结肠炎［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（6）：756-763 ·759 ·

A B C
对照组 对照组 对照组 DSS组 DSS+HCQ组
DSS组 DSS组
（ % ） 110 DSS+HCQ组 15 DSS+HCQ组 **
相对体重百分比 90 ** *** DAI评分 5 ***
100
10
80

70
0 2 4 6 8 0 0 2 4 6 8
时间（d） 时间（d）
D E F
10 对照组 DSS组 DSS+HCQ组 5
*** 4 *** **
8
（ cm ） 6 * ×100 3 （ 分 ）
结肠长度 4 病理评分 2

2 1
0 0
对照组 DSS组 ×200 对照组 DSS组
DSS+HCQ组
DSS+HCQ组

A：各组体重变化；B：各组DAI评分；C：各组结肠大体及结肠长度；D：各组结肠长度定量分析；E：各组结肠组织HE染色；F：各组结肠组织
病理学评分。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=6）。
*
**
***
图1 HCQ减轻DSS肠炎模型鼠肠道炎症
Figure 1 HCQ alleviates intestinal inflammation in DSS⁃induced colitis mice
2.2 HCQ 抑制 DSS 结肠炎模型鼠肠道组织中 NET 生成。
形成 2.5 HCQ通过MEK/ERK/ROS通路抑制NET释放
免疫荧光标记 NE 与 citH3 检测结肠组织 NET 通过 Western blot 检测各组细胞 p⁃ERK、ERK、
的形成情况。结果显示，相比正常对照组，DSS模型 p⁃MEK、MEK 蛋白的水平，结果显示，LPS 刺激后
组小鼠结肠组织中NET水平升高，HCQ处理后可明 MEK、ERK 蛋白磷酸化水平上调，而 HCQ 处理后可
显抑制结肠炎小鼠结肠组织中NET水平（图2）。 显著抑制 MEK、ERK 磷酸化（图 5A）。在 HCQ 预处
2.3 HCQ抑制体外NET形成 理后的中性粒细胞培养基中加入MEK/ERK 通路激
健康人外周血中分离出中性粒细胞，分为3组： 动剂 C16⁃PAF，并给予 LPS 刺激 NET 形成，结果显
对照组、LPS 组和 LPS+HCQ 组。Hoechst 33342 及 示：予以 C16⁃PAF 处理后可逆转 HCQ 对 MEK/ERK
Sytox Green 染色后在荧光显微镜下观察，与对照组 通路的抑制作用，ERK及MEK磷酸化水平明显升高
相比，LPS组可见部分细胞核碎裂弥散，呈纤维网状 （图 5B），同时检测激活 MEK/ERK 信号通路后中性
结构，而给予HCQ 处理，NET 数量减少（图3A）。通 粒细胞ROS的释放情况，结果显示，与LPS+ HCQ组
过荧光酶标仪测定 Hoechst 33342 及 Sytox Green 染 相比，LPS+ HCQ+C16⁃PAF组ROS释放明显增多（图
色后的荧光强度，定量分析 NET 水平，结果显示 5C），提示 C16⁃PAF 逆转了 HCQ 对中性粒细胞 ROS
HCQ处理后可减少LPS诱导的NET形成，与荧光显 释放的抑制作用。最后，荧光显微镜和荧光酶标仪
微镜观察结果一致（图3B）。 测定对照组、LPS组、LPS+HCQ组及LPS+HCQ+C16⁃

2.4 HCQ抑制中性粒细胞ROS释放 PAF组的NET水平，结果显示，与LPS+HCQ组相比，
检测各组细胞的 ROS 水平，DCFH⁃DA 荧光探 加入C16⁃PAF后NET形成增多（图6），以上结果表明
针孵育后的细胞经过相应处理，荧光酶标仪测定 C16⁃PAF 活化 MEK/ERK 后 NET 形成增多，加入

荧光强度，随着 LPS 刺激时间的增加，LPS 组 ROS HCQ 可抑制 NET 形成。以上提示 HCQ 是通过下调
释放增加，而 LPS+HCQ 组 ROS 释放水平，相比与 MEK/ERK 信号通路磷酸化，减少 ROS 释放，从而抑

LPS 组有明显降低（图 4），表明 HCQ 可抑制 ROS 制NET形成。