Page 13 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期 龚 洁，卜治文，徐 晨，等. 利用shRNA慢病毒高效敲降雄性小鼠睾丸基因［J］.
2023年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（6）：749-755 ·755 ·

时，基因编辑技术是在基因组层面上进行操作，基 Exp Ther，2023，384：133-154
因打靶脱靶至基因组其他基因位点后可能导致不 ［6］ IWAKAWA H O，TOMARI Y. Life of RISC：Formation，
可逆的功能和表型改变。而且，脱靶后的位点很难 action，and degradation of RNA⁃induced silencing com⁃
被检测到，可能会产生实验者无法解释的实验结 plex［J］. Mol Cell，2022，82：30-43
［7］ ZHU K Y，PALLI S R. Mechanisms，applications，and
果。慢病毒敲降平台在基因敲降应用上具有显著
challenges of insect RNA interference［J］. Annu Rev
优势。一方面，该平台靶向转录组 mRNA 设计 shR⁃
Entomol，2020，65：293-311
NA 敲降序列，即使出现脱靶效应也不会改变小鼠
［8］ EDWARDS S A，SLOTKIN R K. Broken up but still liv⁃
的基因组序列，产生可遗传的变异；另一方面，慢病
ing together：how ARGONAUTE’s retention of cleaved
毒敲降载体注射至小鼠睾丸生精小管中，仅在注射 fragments explains its role during chromatin modification
部位局部发挥敲降功能，并不会通过血睾屏障传递 ［J］. Genes Dev，2023，37：69-71
至全身，脱靶效应也只发生在睾丸中。虽然直接注 ［9］ KWON S C，JANG H，SHEN S，et al. ERH facilitates
射siRNA或者反义寡核苷酸也可以达到敲减基因表 microRNA maturation through the interaction with the N⁃
达的功能，但是有研究指出 siRNA 在注射后 48 h 达 terminus of DGCR8［J］. Nucleic Acids Res，2020，48：
到最高敲降效率，此后由于无法持续表达扩增而慢 11097-11112
［10］ ZHANG X，LIU F，YANG F，et al. Selectivity of Exportin
慢失效。而本研究注射的是shRNA载体，在侵染细
5 binding to human precursor microRNAs［J］. RNA Biol，
胞后会迅速入核并在细胞核内持续表达加工形成
2021，18：730-737
前体shRNA，再转位至胞质经过加工获得siRNA，敲
［11］ LIU Z，WANG J，CHENG H，et al. Cryo⁃EM structure of
降持续时间较久。
human dicer and its complexes with a pre⁃miRNA sub⁃
本研究前期已构建 Sox30 基因全身性敲除小 strate［J］. Cell，2018，173：1191-1203
鼠，并系统阐述了Sox30全敲小鼠的睾丸表型，以及 ［12］ LIU C，WANG J，ZHANG Y，et al. Efficient delivery of
Sox30 在精子发生过程中的作用机制。在 Sox30 全 PKN3 shRNA for the treatment of breast cancer via lipid
敲小鼠睾丸中，精子发生阻滞在 2~3 步的圆形精子 nanoparticles［J］. Bioorg Med Chem，2022，69：116884
阶段。然而Sox30蛋白的表达一直持续到精子变形 ［13］ LU J，LIU J，GUO Y，et al. CRISPR⁃Cas9：A method for
的晚期，Sox30全敲小鼠模型无法研究其在精子变形 establishing rat models of drug metabolism and pharmaco⁃
的中晚期是否发挥作用。因此，利用慢病毒敲降平台 kinetics［J］. Acta Pharm Sin B，2021，11：2973-2982
［14］ CHEN M，MAO A，XU M，et al. CRISPR⁃Cas9 for cancer
构建的Sox30敲降小鼠模型为研究Sox30在精子变形
therapy：opportunities and challenges［J］. Cancer Lett，
晚期的功能机制奠定了研究基础。
2019，447：48-55
［参考文献］ ［15］ DAI J Q，VOLOSHIN O，POTAPOVA S，et al. Meiotic
knockdown and complementation reveals essential role of
［1］ CHEN Y，ZHENG Y X，GAO Y，et al. Single⁃cell RNA⁃
RAD51 in mouse spermatogenesis［J］. Cell Rep，2017，18
seq uncovers dynamic processes and critical regulators in
（6）：1383-1394
mouse spermatogenesis［J］. Cell Res，2018，28（9）：879-
［16］ CHEN Z H，LING L，SHI X L，et al. Microinjection of
896
antisense oligonucleotides into living mouse testis enables
［2］ ERNST C，ELING N，MARTINEZ⁃JIMENEZ C P，et al.
lncRNA function study［J］. Cell Biosci，2021，11（1）：213
Staged developmental mapping and X chromosome tran⁃
［17］ RAO D D，VORHIES J S，SENZER N，et al. siRNA vs.
scriptional dynamics during mouse spermatogenesis［J］.
shRNA：similarities and differences［J］. Adv Drug Deliv
Nat Commun，2019，10（1）：1251
［3］ GRISWOLD M D. 50 years of spermatogenesis：Sertoli Rev，2009，61（9）：746-759
cells and their interactions with germ cells［J］. Biol Reprod， ［18］ BAI S，FU K，YIN H，et al. Sox30 initiates transcription of
haploid genes during late meiosis and spermiogenesis in
2018，99（1）：87-100
mouse testes［J］. Development，2018，145（13）：164855
［4］ GOU L T，KANG J Y，DAI P，et al. Ubiquitination⁃defi⁃
［19］ 薛江阳，高亭亭，邵彬彬，等. 小鼠精原干细胞系自我更
cient mutations in human piwi cause male infertility by
新和分化能力的体外观察［J］. 南京医科大学学报（自
impairing histone⁃to⁃protamine exchange during spermio⁃
然科学版），2016，36（2）：155-159
genesis［J］. Cell，2017，169（6）：1090-1104
［5］ TRABER G M，YU A M. RNAi⁃based therapeutics and ［收稿日期］ 2022-11-29
（本文编辑：陈汐敏）
novel RNA bioengineering technologies［J］. J Pharmacol