Page 42 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第7期
               ·928 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年7月


              hippocampus of mice in the LPS+MAZ51 group were increased（P < 0.01）and the freezing time was significantly reduced（P < 0.01）.
              Conclusion：The impairing transport function of meningeal lymphatic vessels aggravates LPS ⁃ induced central inflammation and
              cognitive dysfunction in mice by increasing inflammatory mediator accumulation and activating microglia.
             ［Key words］ meningeal lymphatic vessels；microglia；IL⁃6；IL⁃1β；MAZ51；LPS
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2023，43（07）：927⁃933］





                  固有免疫激活是神经系统疾病病理过程的重要                          lymph node，dCLN），随后进入外周器官代谢清除。脑膜
              组成部分。中枢神经系统（central nervous system，               淋巴系统对于清除大脑中的β⁃淀粉样蛋白（amyloid β，
                                                  ［1］
              CNS）的稳态与固有免疫的平衡息息相关 。失调的                          Aβ）、细胞外tau蛋白和α⁃突触核蛋白至关重要                 ［12-14］ 。
              CNS固有免疫参与多种CNS疾病的发生和发展。研                          mLV 转运功能损害可导致神经毒性物质的积累，导
              究CNS与固有免疫之间的关系，有助于更好地了解                           致认知功能障碍。然而，mLV转运功能在中枢炎症
              神经系统疾病的发病机制，制定有效的治疗策略。                            中的作用仍然知之甚少。
                  小胶质细胞（microglia，MG）是大脑固有免疫系                        VEGFR3是一种酪氨酸激酶受体，它与VEGF⁃C
              统的主要细胞成分，受到压力、脑外伤、感染等刺                            结合可诱导淋巴管内皮细胞的增殖和迁移，从而促
              激时被激活并向受损细胞游走迁徙，吞噬死去的                             进淋巴管生成。MAZ51 是 VEGFR3 选择性抑制剂，
                  ［2］                                                             ［15］
              细胞 。大脑受损时，损伤相关分子模式（damage⁃                        能够抑制 mLV 生成          。本研究通过腹腔注射 LPS
              related molecular pattern，DAMP）和病原相关分子模           建立小鼠中枢炎症模型            ［16-17］ ，观察中枢炎症对 mLV
              式（pathogen⁃associated molecular pattern，PAMP）等    的影响，使用 VEGFR3 抑制剂 MAZ51 抑制 mLV 生
              作用于 MG，产生活性氧、补体和促炎细胞因子，如                          成，阐明 mLV 功能障碍对中枢炎症的影响，为临床
              白介素（interleukin，IL）⁃6、IL⁃1β、肿瘤坏死因子⁃α              治疗CNS疾病提供新思路。
             （tumor necrosis factor α，TNF⁃α）等，导致大脑功能进
              一步受损 。MG 的活化和促炎细胞因子的释放在                           1 材料和方法
                      ［3］
              中枢炎症中发挥核心作用。适当的中枢炎症可以                             1.1  材料
              促进细胞碎片的清除和组织修复，恢复神经元稳态                            1.1.1  实验动物
                                   ［4］
              并保护神经元的完整性 。过度且持续的中枢炎症                                 采用成年雄性 SPF 级 C57BL/6 小鼠（6~8 周龄）
              活化 MG，促炎细胞因子大量释放，激活 MG 的神经                        建立模型。实验小鼠购于维通利华，放置在标准实
                      ［5］
              毒性作用 。大量证据表明，中枢炎症是 CNS 疾病                         验室条件中饲养［（25±2）℃，12 h昼夜循环光照］，自
              中最常见的病理之一          ［6-8］ 。因此，调控中枢炎症对于             由饮水摄食。小鼠适应性饲养1周后进行实验。所
              治疗CNS疾病具有重要的意义。                                   有动物实验均经南京医科大学实验动物使用与管
                  近几年的研究表明，脑膜淋巴管（meningeal                      理委员会批准（批准号：IACUC⁃2008037）。
              lymphatic vessel，mLV）参与大脑中大分子毒性介质、                1.1.2  主要试剂与仪器
              免疫细胞、细胞碎片等物质的清除和引流                       ［9- 10］ 。     小鼠 IL⁃6、IL⁃1β Quantikine ELISA 检测试剂盒
              Absinta 等 ［11］ 通过体内磁共振成像的技术证实人类                   （R&D 公司，美国）；LPS 来自大肠杆菌 0111：B4
              mLV 的存在。mLV存在于硬脑膜中，表达淋巴管内                         （Sigma Aldrich 公司，美国）；Iba⁃1 抗体（Wako 公司，

              皮细胞的特异性标志物：血管内皮生长因子受体 3                           日本）；LYVE⁃1 抗体（Abcam 公司，美国）；OVA⁃647
             （vascular endothelial growth factor receptor 3，VEG⁃  （Thermo Fisher Scientific 公司，美国）；RIPA 缓冲液
              FR3）和淋巴管内皮细胞透明质酸受体 1（lymphatic                    （上海碧云天公司）；蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂
              vessel endothelial hyaluronan receptor 1，LYVE⁃1），受  （Roche公司，瑞士）；DAPI染液（Abcam公司，美国）；

              到血管内皮生长因子 C（vascular endothelial growth           脑立体定位仪（深圳瑞沃德公司）。
              factor C，VEGF⁃C）/VEGFR3 信号的持续调控        ［10］ 。它    1.2  方法
              能够将外周免疫细胞、细胞因子、大分子蛋白和                             1.2.1  动物分组及给药方法

              CNS 衍生的抗原从脑膜间质和脑脊液（cerebrospi⁃                         首先将 16 只 C57BL/6 小鼠随机分为 4 组，LPS
              nal fluid，CSF）中引流至颈深淋巴结（deep cervical             组 12 只，分别腹腔注射 LPS（2 mg/kg），12、24、72 h
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