Page 8 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第9期
               ·1186 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年9月


              lymphoblastic leukemia drug. The effect of HDS on T⁃cell lymphoblastic leukemia may be accomplished by interfering cell cycle and
              apoptosis，and DNA damage repair through CHK1/CHK2 signaling pathway.
             ［Key words］ T⁃cell lymphoblastic leukemia；4⁃hydroxysalicylaniline；S phase cell cycle arrest；apoptosis；DNA damage
                                                                           ［J Nanjing Med Univ，2023，43（09）：1185⁃1193］





                  急性淋巴细胞白血病是一种侵袭性肿瘤，包括                          科技有限公司。培养基 RPMI⁃1640、DMSO（Gibco
              急性 B 淋巴细胞白血病和急性 T 淋巴细胞白血病。                        公司，美国），胎牛血清（fetal bovine serum，FBS，
              虽然 T 淋巴细胞白血病 5 年生存率超过 85%，但疾                      Hyclone 公 司 ，美 国）；一 抗 Cdc25A、CyclinA2、
              病复发率与死亡率仍非常高              ［1-2］ 。目前迫切需要开          CDK2、GAPDH、Bad、Bax、Bcl⁃XL、Bcl⁃2、γ⁃H2AX、
              发多药化疗的药物谱，针对性地杀伤肿瘤细胞，提                            CHK1、p⁃CHK1、CHK2、p⁃CHK2、Ki⁃67抗体，HRP标
              高治疗效果。对于T淋巴细胞白血病或其他恶性肿                            记的二抗，R488 标记的荧光二抗（Abcam 公司，美
              瘤，细胞异常增殖是常见的特征              ［3-4］ 。在特定的细胞         国）；PI/RNase细胞周期染色液和Annexin⁃V⁃FITC/PI
              类型中干扰这一过程可能会提供潜在的治疗方法。                            试剂盒、流式细胞分析仪（BD 公司，美国）；Synergy
              在细胞增殖过程中，DNA损伤修复是细胞正常运行                           H4多功能酶标仪（BioTek公司，美国）；Leica正置荧
              的保证。因此，DNA损伤修复异常成为恶性肿瘤转                           光显微镜、Zeiss LSM710共聚焦显微镜（Leica 公司，
              化的关键。无数新药通过阻断DNA损伤修复来干扰                           德国）。本研究经过同济大学附属上海第十人民医
              异常增殖，从而在抗肿瘤方面取得了惊人效果                   ［5-7］ 。    院伦理委员会审查批准［SYXK（沪）2021⁃0012］。
                  在DNA复制和损伤修复的过程中，核糖核苷酸                         1.2  方法
              还原酶（ribonucleic reductase，RNR）是催化核糖核              1.2.1 细胞培养
              苷二磷酸合成脱氧核糖核苷酸的关键酶                    ［8-9］ 。RNR        Jurkat 和 Hut⁃78 细胞用含 10% FBS 和 1%青霉
              的上调和激活，可导致肾上腺皮质癌、乳腺癌、子宫                           素⁃链霉素的RPMI⁃1640培养基培养，置于37 ℃、含
              内膜癌、胶质母细胞瘤、肝细胞癌等恶性肿瘤的发                            5% CO2的培养箱中，每2~3 d更换1次细胞培养液，
              生，提示RNR可能是肿瘤治疗的潜在靶点                   ［10-13］ 。基  以维持细胞培养所需条件。
              于 RNR 的抗癌药物或小分子药物有吉西他滨、氯                          1.2.2 细胞CCK⁃8实验
              法拉滨、羟基脲、曲平等          ［14-16］ 。而4⁃羟基水杨酰苯胺               取处于对数生长期的 Jurkat 和 Hut⁃78 细胞，以
             （4⁃hydroxysalicylaniline，HDS）已被证明，可通过与             2×10 ~3×10 个/mL的密度接种于96孔板，HDS按梯
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              酶活性位点的竞争结合而抑制RNR酶活性，这也提                           度稀释后加入对应96孔板中，在恒温培养箱中培养
              示 HDS 可能是一种治疗某些癌症的潜在药物                   ［14，17］ 。  24、48、72 h 后，于检测前 2 h 向每孔加入 10 μL 的
              事实上，HDS 已被用于治疗多种肿瘤，如肝细胞癌                          CCK⁃8 试剂，继续避光放入 37 ℃恒温培养箱孵育，
              和多发性骨髓瘤       ［14］ 。但HDS在T淋巴细胞白血病中                酶标仪波长在450 nm下测量每孔吸光度值，计算细
              的作用及其机制尚不清楚。                                      胞存活率，用CalcuSyn软件计算HDS对细胞的半数
                  鉴于 HDS 的临床优势及其通过抑制细胞增殖                        致死量（IC50 ）。
              对多种癌症的疗效，本研究在体内外实验中观察了                            1.2.3 软琼脂糖克隆形成实验
              HDS 对 T 淋巴细胞白血病的疗效，为开发 HDS 作为                          配制3.5%和 1.66%琼脂糖液，高压灭菌后置于
              潜在的抗T淋巴细胞白血病药物提供了基础。                              42 ℃水浴锅备用；配制含 20%血清的 RPMI⁃1640 培

                                                                养液备用；将 3.5%的琼脂糖液和 20%的 RPMI⁃1640
              1  材料和方法
                                                                培养液按 1∶5 比例混合，在 12 孔板中制备下层胶
              1.1  材料                                           （每孔 1 mL）；收集对数生长期的 Jurkat 和 Hut⁃78 细
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                  人源细胞株Jurkat、Hut⁃78细胞购自美国ATCC                  胞，配制密度为 4×10 ~5×10 个/mL 细胞悬液，根据
             （American Type Culture Collection）。HDS 由上海中        浓度加入相应体积的HDS母液；将1.66%琼脂糖与细
              科院药物所惠赠，用二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，                胞悬液按1∶5的比例混合配制上层胶（每孔700 μL），
              DMSO）配成 40 mmol/L 的溶液储存于-20 ℃备用。                  室温凝固后将 12 孔板置于培养箱中，每 5~7 d 补充
              5 周龄雄性 BALB/c 裸鼠购自江苏华创信诺医药                        1 次培养液，集落形成后每孔加入 0.005%的龙胆紫
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