Page 12 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第9期
·1190 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年9月

A
0 μmol/L 25 μmol/L 50 μmol/L 100 μmol/L 300 μmol/L
PI 5 5 5 5 5
10 0.13% 0% 10 1.31% 6.03% 10 6.34% 33.6% 10 10.2% 30.0% 10 5.78% 48.8%
Jurkat 10 4 3 10 4 3 10 4 3 10 4 3 10 4 3
10
10
10
10
10
10 2 10 2 10 2 10 2 10 2
99.9% 0% 85.9% 6.75% 53.9% 6.12% 42.8% 17.1% 14.2% 31.3%
1
2
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10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5
Annexin V
B
PI
5
5
5
10 0.55% 0.22% 10 2.53% 6.51% 10 12.5% 24.5% 10 12.5% 27.8% 10 12.8% 35.4%
5
5
10 4 10 4 10 4 10 4 10 4
Hut⁃78 10 3 10 3 10 3 10 3 10 3
10 2 10 2 10 2 10 2 10 2
99.2% 0% 88.4% 2.57% 55.2% 7.74% 42.2% 17.5% 27.5% 24.3%
10 1 10 1 10 1 10 1 10 1
1
3
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10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 5
Annexin V
（ % ） 100 *** （ % ） 80 *** 0 Jurkat 300 0 Hut⁃78 300 HDS（μmol/L）
C D E
100
Jurkat细胞凋亡率 60 *** *** *** Hut⁃78细胞凋亡率 40 *** *** *** Bad -23 kDa
100
80
60
40
Bax
-20 kDa
20
20
0
0 25 50 100 300 0 0 25 50 100 300 Bcl⁃XL -26 kDa
HDS（μmol/L） HDS（μmol/L） Bcl⁃2 -26 kDa
GAPDH -37 kDa
F Jurkat 0 μmol/L HDS G *** Hut⁃78 0 μmol/L HDS
蛋白相对表达量 8 6 4 *** *** *** *** 300 μmol/L HDS 蛋白相对表达量 5 4 3 2 *** *** *** 300 μmol/L HDS
100 μmol/L HDS
100 μmol/L HDS
0 2 *** *** 1 0 *** ***
Bad Bax Bcl⁃XL Bcl⁃2 Bad Bax Bcl⁃XL Bcl⁃2
A、B：用HDS（0、25、50、100、300 μmol/L）作用于Jurkat（A）和Hut⁃78（B）细胞48 h后，收集细胞，进行Annexin⁃V/PI双重染色，并用流式细胞
仪检测；C、D：Jurkat（C）和Hut⁃78（D）细胞的凋亡率，与0 μmol/L HDS 处理组比较， P < 0.001（n=3）；E：用Western blot 检测HDS作用48 h后，
***
***
细胞 Bad、Bax、Bcl⁃XL 和 Bcl⁃2 的蛋白表达水平；F、G：Jurkat 细胞（F）和 Hut⁃78 细胞（G）各蛋白表达的灰度值分析，与 0 μmol/L 组比较， P <
0.001（n=3）。
图3 HDS可诱导T淋巴细胞白血病细胞凋亡
Figure 3 HDS can induce the apoptosis of T⁃lymphoblastic leukemia cells
和治疗策略非常有意义。 因此，研究了 HDS 作用后 T 淋巴细胞白血病细胞的
本研究以 T 淋巴细胞白血病细胞株 Jurkat 和 凋亡表型。Annexin V/PI 双重染色和流式细胞仪
Hut⁃78 细胞为研究对象，探讨 HDS 对 T 淋巴细胞白 检测结果显示，T 淋巴细胞白血病细胞株 Jurkat 和
血病的体外治疗作用。通过 CCK⁃8 和克隆形成实 Hut⁃78 细胞发生明显的细胞凋亡，在特定剂量下培
验，发现 HDS 以剂量和时间依赖的方式显著抑制 T 养 48 h，凋亡率为 60%~80%。此外，Bad、Bax、Bcl⁃2
淋巴细胞白血病细胞的生长。CCK⁃8 结果表明， 和 Bcl⁃XL 在细胞凋亡中起重要作用 ［19］ 。HDS 处理
HDS 通过下调 T 淋巴细胞白血病细胞中 Cdc25A、 肿瘤细胞后，Western blot结果表明，促凋亡蛋白Bax
CDK2 和 Cyclin A2 的蛋白水平，以剂量和时间依赖 和Bad表达上调，抗凋亡蛋白Bcl⁃2和Bcl⁃XL表达降
的方式阻断细胞周期的S期。 低，呈剂量依赖关系，提示这可能是HDS抗T淋巴细
除了细胞周期停滞外，细胞死亡也可能导致肿 胞白血病的相关机制。此外，与细胞凋亡相关的详
瘤抑制 ［18］ 。细胞凋亡是细胞死亡的常见亚型 ［19］ 。 细通路还有待进一步探索。