Page 10 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第9期
·1188 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年9月

A B C
OH 24 h 24 h
NH OH （ % ） 100 48 h （ % ） 100 48 h
72 h
72 h
Jurkat 细胞存活率 50 Hut⁃78 细胞存活率 50
O 0 0
0 25 50 75 100 150 200 300 400 0 25 50 75 100 150 200 300 400
HDS（μmol/L） HDS（μmol/L）
D HDS（μmol/L） E HDS（μmol/L）
0 100 300 0 100 300
Jurkat Hut⁃78

*** *** ***
***
（ 个 ） 200 *** （ 个 ） 250 ***
200
150
150
克隆数量 100 克隆数量 100
50
50
0 0
0 100 300 0 100 300
HDS（μmol/L） HDS（μmol/L）
A：HDS的分子结构；B、C：Jurkat（B）和Hut⁃78细胞（C）以不同浓度（0、25、50、75、100、150、200、300、400 μmol/L）HDS处理24、48、72 h，CCK⁃8检测
细胞活力（n=3）；D、E：0、100、300 μmol/L HDS作用于Jurkat细胞（D）和Hut⁃78细胞（E），集落形成实验显示HDS对Jurkat细胞和Hut⁃78细胞的
集落形成能力有抑制作用（n=3）。两组比较， P < 0.001。
***
图1 HDS可抑制T淋巴细胞白血病细胞的增殖和克隆形成
Figure 1 HDS can inhibit the proliferation and colony formation of T⁃lymphoblastic leukemia cells

渐增高，且呈浓度依赖性（图 2C、D）。Western blot 胞的 DNA 损伤修复过程，进而加重细胞 DNA 损
实验结果也表明，经HDS处理，Jurkat和Hut⁃78细胞 伤，以 100 μmol/L 和 300 μmol/L 的 HDS 处理 Jurkat
的 Cdc25A、CDK2、Cyclin A2 表达水平明显下调（图 （图4A）和Hut⁃78（图 4B）细胞 48 h，并检测 DNA 合
2E~G）。综上所述，HDS通过抑制Cdc25A、CDK2和 成损伤的标志基因γ⁃H2AX 的表达。结果显示，
Cyclin A2 等细胞周期 S 期相关蛋白的表达，使 T 淋 与对照组相比，HDS处理组中，Jurkat和Hut⁃78细胞
巴细胞白血病细胞停滞于细胞周期S期。 γ⁃H2AX 阳性细胞比例明显增加，且呈剂量依赖关
2.3 HDS可诱导T淋巴细胞白血病细胞凋亡 系（图 4C、D）。同时，用免疫印迹法检测 DNA 损伤
为了进一步探讨HDS对T淋巴细胞白血病细胞 相关蛋白CHK1、p⁃CHK1、CHK2、p⁃CHK2和γ⁃H2AX
的影响，并确定T淋巴细胞白血病细胞的增殖抑制是 的表达水平（图 4E~G）。结果表明，γ⁃H2AX的表达
否是通过诱导凋亡而引起，用不同浓度的HDS（0、25、 与免疫荧光染色数据的趋势相一致，且 HDS 可通
50、100、300 μmol/L）处理 Jurkat 和 Hut⁃78 细胞 48 h 过磷酸化相应的下游分子 CHK1 和 CHK2，抑制
（图 3A、B）。细胞流式结果表明，HDS 可显著促进 DNA 损伤修复过程，导致 T 淋巴细胞白血病细胞
Jurkat 和 Hut⁃78 细胞的凋亡，且呈浓度依赖性（图 DNA 损伤加重。
3C、D）。同时，通过免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋 2.5 HDS 可抑制小鼠中 T 淋巴细胞白血病肿瘤的
白Bad、Bax、Bcl⁃XL和Bcl⁃2的表达。结果显示，在两 生长
细胞系中，促凋亡蛋白Bad和Bax表达上调，抗凋亡蛋 建立裸鼠皮下T淋巴细胞白血病细胞异种移植
白Bcl⁃XL和Bcl⁃2表达降低，且呈剂量依赖关系（图 模型来研究HDS对T淋巴细胞白血病肿瘤的治疗效
3E~G）。这些结果与流式细胞检测的趋势是一致的， 果。采用 5 周龄 BALB/c 裸鼠，皮下注射 Jurkat 细胞
即HDS可显著诱导T淋巴细胞白血病细胞的凋亡。 （1×10 个/只）。小鼠T淋巴细胞白血病肿瘤形成后，
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2.4 HDS 可通过 CHK1/CHK2 信号通路阻断 T 淋巴 HDS组每只每天腹腔注射100 mg/kg HDS，对照组注
细胞白血病细胞的DNA损伤修复过程 射等量的 DMSO，同时每天测量肿瘤大小和小鼠体
为了确定 HDS 是否影响 T 淋巴细胞白血病细 重，共13 d。数据显示，与对照组相比，经HDS处理