Page 40 - 南京医科大学自然版

第44卷第10期
·1356 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年10月

中孵育 20 min，吸除上清，用 JC⁃1 染色缓冲洗涤液 数据以均数±标准误（x ± sx）表示。多个样本间均数
洗涤 2 次，加入 2 mL 细胞培养液，使用荧光显微镜 比较采用单因素方差分析，组间均数比较使用LSD⁃
观察并拍照，使用 Image J 软件分析平均荧光强度， t检验法。P < 0.05为差异具有统计学意义。
计算红色/绿色荧光度比值。
2 结 果
1.2.8 ROS检测
将各组细胞接种于提前放置爬片的24孔板中， 2.1 巨噬细胞鉴定
向各孔加入含10 μmol/L DCFH⁃DA的RPMI 1640培 免疫荧光染色结果显示，培养的细胞中 CD68
养基，37 ℃细胞培养箱中孵育1 h。弃去上清，使用 （巨噬细胞标志物）表达阳性，提示 PMA 成功诱导

荧光显微镜拍摄细胞内ROS荧光图像。使用Image THP⁃1细胞贴壁分化为巨噬细胞（图1）。
J软件分析平均荧光强度。 2.2 Li对巨噬细胞活性的影响

1.3 统计学方法 与 Control 组 相 比 ，不 同 浓 度 Li（1、10、100、
数据分析采用 GraphPad Prism 6.0 软件。所有 1 000、10 000 nmol/L）处理巨噬细胞24 h后，细胞活性

CD68 DAPI Merge

50 μm 50 μm 50 μm
图1 巨噬细胞免疫荧光鉴定（×400）
Figure 1 Immunofluorescence identification of cultured macrophages（×400）

差异无统计学意义（P > 0.05），提示在1~10 000 nmol/L 组 NLRP3、Caspase⁃1 p20 表达水平降低，差异有统
内，Li对巨噬细胞无明显细胞毒性（图2）。1 nmol/L 计学意义（P <0.05，图 3）。以上结果提示 Li（10、
浓度太低不易显示出差异，10 000 nmol/L在人体内浓 100、1 000 nmol/L）可浓度依赖性抑制 SiO2 诱导的
度太高，故选择 10、100、1 000 nmol/L 3 个浓度梯 NLRP3及Caspase⁃1 p20蛋白表达。
度完成后续实验。 2.4 Li 对巨噬细胞 IL⁃1β、IL⁃10 及 TGF⁃β1 表达的
影响
150
SiO2 组 IL⁃1β水平为（127.00±17.05）pg/mL，较
（%） 100 Control 组（37.72±10.23）pg/mL 明显增加，差异有
Cell viability 50 （10 nmol/L）组、SiO2+Li（100 nmol/L）组及 SiO2+Li
统计学意义（P < 0.001）；与 SiO2 组相比，SiO2+Li

（1 000 nmol/L）组 IL ⁃ 1β 水 平 分 别 为（77.40 ±
12.55）、（64.74±6.86）、（41.55±12.74）pg/mL，较 SiO2
0
Li（nmol/L） 0 1 10 100 1 000 10 000 组降低，差异有统计学意义（P < 0.05，P < 0.001，图
图2 Li对培养的巨噬细胞活性的影响（n=3） 4A）。
Figure 2 Effects of Li on the cell viability in cultured mac⁃ SiO2 组 IL⁃10 水平为（212.70±6.97）pg/mL，较
rophages（n=3）
Control组（70.88±3.21）pg/mL明显增加，差异具有统
2.3 Li对巨噬细胞NLRP3活化的影响 计学意义（P < 0.001）；SiO2+Li（10 nmol/L）组、SiO2+Li
与Control组相比，50 μg/cm SiO2作用于巨噬细胞 （100 nmol/L）组及 SiO2+Li（1 000 nmol/L）组 IL⁃10 水
2
24 h，可显著上调NLRP3和活化的Caspase⁃1 p20蛋白 平分别为（127.80±7.70）、（110.80±6.53）、（85.13±
表达（P <0.001）。与SiO2组相比，SiO2+Li（10 nmol/L） 7.17）pg/mL，较SiO2组明显降低，差异有统计学意义
组、SiO2+Li（100 nmol/L）组及 SiO2+Li（1 000 nmol/L） （P < 0.001，图4B）。