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第44卷第10期
               ·1324 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2024年10月


              nuclear localization may indicate poor prognosis in PC and serve as a crucial basis for clinical decision making. Identifying methods to
              block or inhibit S100A4 nuclear localization may provide a new approach to suppress PC metastasis，especially the early metastasis，

              and improve the prognosis of PC patients.
             ［Key words］ pancreatic cancer；S100A4；SUMOylation；nuclear localization；metastasis
                                                                      ［J Nanjing Med Univ，2024，44（10）：1323⁃1336，1434］






                  胰腺癌（pancreatic cancer，PC）是一种高度致命              及 PC 患者生存之间的关系报道和机制研究。有文
                                                                      ［12］
              的恶性肿瘤，是我国第6大癌症致死原因 。虽然根                           献报道 ，在人关节软骨细胞中，S100A4蛋白核易位
                                                 ［1］
              治性切除手术仍是目前最有效的治疗方法，但该疾                            可能需要小泛素相关修饰物（small ubiquitin⁃related
              病通常起病隐匿，侵袭性强，进展迅速，80%~85%的                        modifier，SUMO）参与，而 SUMO 化修饰在蛋白质核
                                         ［2］
              患者在诊断时已无法手术切除 。即使有机会接受                            质运输、蛋白质之间的相互作用、转录调控、DNA修
                                                         ［3］
              手术，患者预后也极差，5年生存率仅为12%左右 。                         复以及基因组稳定性维持等方面起着重要作用，与
              常规放化疗通常会发生肿瘤耐药和抵抗，效果不                             细胞周期、肿瘤内环境的改变以及PC的发生和发展
                ［2］
              佳 。因此，深入研究PC的发生发展机制不仅有助                           密切相关 。
                                                                        ［13］
              于发现可以用于早期诊断、预后评估和治疗效果监                                 据此，本研究利用 PC 病程进展的组织芯片，通
              测的生物标志物，更能寻找到真正有效的药物靶                             过免疫组化和 HALO 数字病理精准分析平台等技
              点，最终改善PC患者的预后。                                    术，定量 S100A4 在组织细胞中的表达，特别是细胞
                  S100A4作为S100蛋白家族中的一员，具有2个                     核内的表达情况，并分析各检测指标与各临床参数
              EF双螺旋结构（手型钙离子结合区），当此区与钙离                          及生存期之间的关系，旨在找到PC侵袭性和不良预
              子结合后其构象就发生变化，暴露出其结合位点，                            后的预测因子。同时，验证 PC 细胞中 S100A4 蛋白
              进而通过与相应靶蛋白的结合发挥调控细胞运动、                            的SUMO化修饰是否影响其核定位，在此基础上，通
              侵袭、分裂和存活等生物学效应，与肿瘤的发生和                            过构建细胞研究模型，观察调控S100A4核定位对改
              发展密不可分       ［4-5］ 。本课题组前期通过全景单细胞                 变 PC 细胞运动与侵袭能力的作用并探究可能的作
              测序技术，构建人PC的原发灶和配对肝转移灶的高                           用机制。
              分辨率单细胞图谱，发现S100A4是具有高转移能力
                                                                1  材料和方法
              的 PC 细胞的标志物之一（数据未发表）。通过免疫
              组化实验观察到（图 1）：与原发灶的癌性导管细胞                          1.1  材料
              相比，在转移灶的癌细胞中S100A4蛋白的阳性表达                              无水乙醇、二甲苯（国药集团化学试剂有限公
              更强；并且S100A4蛋白在细胞核中的强阳性表达现                         司），Trizol试剂、0.1%结晶紫水溶液（Proteinbio公司，
              象在癌周浸润灶和远处转移灶中的 PC 细胞中特别                          中国），聚乙烯亚胺（polyethyleneinine，PEI）水溶液、
              明显。S100A4 在多种癌症中发挥促进肿瘤转移的                         Polybrene（Sigma公司，美国），DMEM 培养基、胎牛血
              作用 ，但涉及的分子机制仍不清楚。S100A4分布                         清、Opti⁃MEM（Gibco公司，美国），Lipofectamine 3000
                  ［6］
              于不同的亚细胞区室，包括细胞核、细胞质和细胞                           （Invitrogen公司，美国），青⁃链霉素、PBS、细胞胰酶
              外空间，而其作用机制可能取决于其蛋白的亚细胞                            消化液（上海碧云天公司），无血清细胞冻存液（苏
              定位 。据文献报道，高度转移性肝细胞癌细胞外                            州新赛美公司），嘌呤霉素（MCE 公司，中国），ECL
                  ［5］
              泌体中的 S100A4 可以通过激活 STAT3 信号通路促                    超敏感化学试剂（Biosharp 公司，中国），PAGE 凝胶
                        ［7］
              进肿瘤转移 。在细胞质中，S100A4与细胞骨架和                         快速制备试剂盒（上海雅酶生物医药科技有限公
                                           ［5］
              质膜中的许多伴侣蛋白相互作用 ，如非肌肉肌球蛋                           司），NE⁃PER 细胞核和细胞质提取试剂盒（Ther⁃
                                                                            TM
                  ［8］
              白 Ⅱ 、p53 等。 当 S100A4 位于细胞核时，可能会                   mo Scientific 公司，美国），靶向剪切反转座酶技术
                        ［9］
              影响基因的转录功能，如基质金属蛋白酶（matrix                        （cleavage under targets and tagmentation，CUT&Tag）
                                     ［10］
              metalloproteinase，MMP）⁃14 和 E⁃钙黏蛋白 。              试剂盒 Hyperactive Universal CUT&Tag Assay Kit for
                                                     ［11］
                  迄今，尚未见 S100A4 核定位与 PC 发生发展以                   Illumina（南京诺维赞公司），S100A4、泛素结合酶
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