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第44卷第11期 潘锦堃，李超普，张 许，等. miR⁃199a⁃5p在肝脏组织中的表达及其作用的初步研究［J］.
2024年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（11）：1510-1516 ·1513 ·

用，分别在 Hepa1⁃6 和 AML12 细胞中过表达 miR⁃ 2.3 miR⁃199a⁃5p靶向CD36
199a⁃5p（miR⁃199a⁃5p⁃mimic），并对 miR⁃199a⁃5p 的 为深入探讨miR⁃199a⁃5p对肝细胞内TAG含量
过表达效率进行验证（图 2A、B）。肝细胞经过 的影响机制，通过 miRDB 网站预测了 miR⁃199a⁃5p
300 μmol/L OA 处理 24 h 后，miR⁃199a⁃5p 过表达的 的靶基因，发现CD36 mRNA的3′ UTR区域包含2个
Hepa1⁃6 细胞和 AML12 细胞内 TAG 含量均显著降 miR⁃199a⁃5p的靶向位点，这可能导致其表达水平下
低（图2C、D），而使用miR⁃199a⁃5p抑制剂处理后，细 降（图 3A）。为验证 miR⁃199a⁃5p 是否靶向 CD36
胞内 TAG 含量增加差异均有统计学意义（图 2E、 mRNA 的 3′ UTR 区域并影响其蛋白质翻译，将
F）。以上结果提示miR⁃199a⁃5p可能通过调节肝细 CD36 mRNA 的3′ UTR克隆后通过同源重组的方法
胞中TAG含量来影响肝脏脂质代谢过程。 插入 PGL3 质粒的下游（图 3B）。随后在 Hepa1⁃6 细

A B C D
GSE13840 ND HFD 8 3 *
8 000 * 6 ** 2
miR⁃199a⁃5p expression level 4 000 miR⁃199a⁃5p expression level 4 2 miR⁃199a⁃5p expression level 1
6 000

2 000
0
ND HFD 0 Fed Fast
0
WT ob/ob
A：The expression levels of miR⁃199a⁃5p in GEO database GSE13840（n=8 for the WT group and n=10 for the ob/ob group）. B：Liver oil red（ORD）
staining was observed in C57BL/6J mice after feeding normal diet（ND）and high⁃fat diet（HFD）for 15 weeks（×40）. C：Expression levels of miR⁃199a⁃5p
in the liver tissues of the ND and HFD mice（n=3）. D：Expression levels of miR⁃199a⁃5p in mice with ND under the state of feeding and starvation for 16 h，
* **
P < 0.05 and P < 0.01（n=3）.
图1 不同营养状态下小鼠肝脏中miR⁃199a⁃5p的表达水平
Figure 1 Expression levels of miR⁃199a⁃5p in mice liver tissues under different nutritional status

A C E
Hepa1⁃6 NC⁃mimic NC⁃inhibit
1 500 miR⁃199a⁃5p⁃mimic miR⁃199a⁃5p⁃inhibit
*** Hepa1⁃6 Hepa1⁃6
miR⁃199a⁃5p expression level 500 （μmol/g） 200 * （μmol/g） 200 **
1 000
150
150
2.0
1.5
1.0
0.5 100 100
0 TAG 50 TAG 50
miR⁃199a⁃5p⁃mimic 0 BSA OA 0 BSA OA
NC⁃mimic
B AML12 D NC⁃mimic F NC⁃inhibit
2 000 ** miR⁃199a⁃5p⁃mimic miR⁃199a⁃5p⁃inhibit
1 500
AML12
AML12
miR⁃199a⁃5p expression level 1 000 （μmol/g） 250 * （μmol/g） 250
*
500
200
200
2.0
150
150
1.5
1.0
0.5 100 100 *
0 TAG 50 TAG 50
NC⁃mimic
miR⁃199a⁃5p⁃mimic 0 BSA OA 0 BSA OA
A，B：Overexpression efficiency of miR⁃199a⁃5p mimic transfected in Hepa1⁃6（A）and AML12（B）cells. C，D：Hepa1⁃6（C）and AML12（D）
cells overexpressed with miR⁃199a⁃5p were treated with serum⁃free medium supplemented with 300 μmol/L OA for 24 h，and samples were collected for
detection of intracellular TAG content. E，F：After the expression of miR⁃199a⁃5p was inhibited in Hepa1⁃6（E）and AML12（F）cells，serum free medi⁃
um supplemented with 300 μmol/L OA was used for 24 h，and the samples were collected for detection of intracellular TAG content. P < 0.05，P < 0.01，
*
**
***
and P < 0.001（n=3）.
图2 miR⁃199a⁃5p调节Hepa1⁃6和AML12细胞中脂质水平
Figure 2 miR⁃199a⁃5p regulated lipid levels in Hepa1⁃6 and AML12 cells