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第44卷第11期 南京医科大学学报（自然科学版）
2024年11月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·1517 ·

·基础研究·

结核分枝杆菌Rv2647蛋白对肺组织损伤效应的初步研究

金 霄 ，陈晓林 ，姚 静 ，杜兴冉 ，颜海豪 ，李国莉 ，冯旰珠 1*
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南京医科大学第二附属医院呼吸与危重症医学科，江苏 南京 210011；南京医科大学附属逸夫医院呼吸与危重症医学科，
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江苏 南京 211166；南京医科大学附属江宁医院呼吸与危重症医学科，江苏 南京 211100；江苏省疾病预防与控制中心
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慢性传染病防治所，江苏 南京 210009
［摘 要］ 目的：通过噬菌体重组技术分别构建结核分枝杆菌Rv2647基因的敲除株和回补株以及过表达Rv2647的耻垢分枝
杆菌（Mycobacterium smegmatis，Ms），评估结核分枝杆菌Rv2647蛋白对模型鼠肺组织的损伤效应。方法：构建同源交换位点并
整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组，获取噬菌粒并将其导入Ms，构建具有同源交换位点的重组噬菌体。体外扩增获得高滴度
重组噬菌体并转染结核分枝杆菌（H37Rv），37 ℃静置培养 28 d，挑取单克隆进行 PCR 验证，获得 Rv2647 基因敲除株
（H37RvΔRv2647）。PCR 扩增Rv2647基因并通过无缝克隆分别将其整合到载体pMV361和pMV261多克隆位点处，获得阳性
质粒后分别电转化H37RvΔRv2647和Ms，获得结核分枝杆菌回补株（H37RvΔRv2647：：Rv2647）及过表达Rv2647的耻垢分枝
杆菌（Ms：：Rv2647）。分别以H37Rv、H37RvΔRv2647、H37RvΔRv2647：：Rv2647、Ms及Ms：：Rv2647的菌液经气管攻击C57BL/6小
鼠，分别比较 H37Rv（30 d）与 Ms（7 d）模型鼠的存活率、肺组织细菌负荷及肺组织病理损伤程度。结果：PCR 结果显示，
H37RvΔRv2647 中 Rv2647 基因缺失，而 H37RvΔRv2647：：Rv2647 及 Ms：：Rv2647 中 Rv2647 基因皆存在。H37RvΔRv2647、
H37Rv及H37RvΔRv2647：：Rv2647组模型鼠30 d存活率分别为100.00%、83.33%及83.33%；Ms和Ms：：Rv2647组模型鼠的7 d
存活率分别为100.00%和83.33%；H37RvΔRv2647组模型鼠肺组织细菌负荷（lgCFU）为（3.40±0.18），显著低于H37Rv组（3.86±
0.15，P < 0.001）和 H37RvΔRv2647：：Rv2647 组（3.80±0.16，P < 0.01）；H37RvΔRv2647 组模型鼠肺组织炎症面积（%）为（4.37±
3.06），显著低于H37Rv组（62.76±14.24，P < 0.001）和H37RvΔRv2647：：Rv2647组（67.37±0.45，P < 0.001）；Ms组模型鼠肺组织
lgCFU为（2.53±0.16），显著低于Ms：：Rv2647组（2.81±0.13，P < 0.01）；Ms组模型鼠肺组织炎症面积（%）为（5.71±1.29），显著低
于 Ms：：Rv2647 组（33.13±13.84，P < 0.05）。结论：成功构建了结核分枝杆菌 Rv2647 基因敲除株（H37RvΔRv2647）及回补株
（H37RvΔRv2647：：Rv2647）以及过表达 Rv2647 的耻垢分枝杆菌（Ms：：Rv2647）。Rv2647 蛋白可能通过抑制宿主对结核分枝
杆菌的清除，加重了模型鼠肺组织病理损伤。
［关键词］ 结核分枝杆菌；差异区域；Rv2647蛋白；噬菌体重组技术；肺组织损伤
［中图分类号］ R521 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2024）11⁃1517⁃08
doi：10.7655/NYDXBNSN240642

Preliminary study on the effect of Mycobacterium tuberculosis Rv2647 protein on lung
injury

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JIN Xiao ，CHEN Xiaolin ，YAO Jing ，DU Xingran ，YAN Haihao ，LI Guoli ，FENG Ganzhu 1*
1 Department of Pulmonary and Critical Care Medicine，the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，
Nanjing 210011；Department of Pulmonary and Critical Care Medicine，the Affiliated Sir Run Run Hospital of
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Nanjing Medical University，Nanjing 211166；Department of Pulmonary and Critical Care Medicine，the Affiliated
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Jiangning Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 211100；Institute of Chronic Infectious Diseases
Prevention and Control，Jiangsu Province Center for Disease Control and Prevention，Nanjing 210009，China
［Abstract］ Objective：To constract the Rv2647⁃deleted strain and Rv2647⁃complemented strain of Mycobacterium tuberculosis（M. tb）
and Rv2647⁃overexpressing Mycobacterium smegmatis（Ms：：Rv2647）by phage recombination technique，and to evaluate the effect of

［基金项目］ 国家自然科学基金（82070017）
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通信作者（Corresponding author），E⁃mail：fgz62691@163.com