Page 48 - 南京医科大学自然版

第44卷第11期
·1514 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年11月

胞中共转该质粒与表达海肾荧光素的对照质粒 节细胞内脂质含量，在 Hepa1⁃6 细胞中同时过表达
（NC⁃mimic）以及miR⁃199a⁃5p⁃mimic，24 h后检测萤 miR⁃199a⁃5p和CD36，RT⁃qPCR验证miR⁃199a⁃5p和
火虫荧光素以及海肾荧光素的强度。结果显示，过 CD36过表达效率（图3D）。结果显示，CD36的过表
表达miR⁃199a⁃5p组的萤火虫荧光素水平显著降低 达抵消了miR⁃199a⁃5p过表达引起的细胞内TAG含
（图3C）。提示，miR⁃199a⁃5p的过表达降低了CD36 量降低（图 3E）。以上结果说明，miR⁃199a⁃5p 可能
mRNA的翻译水平。 通过靶向抑制 CD36 mRNA 的翻译，进而影响肝细
为进一步验证 miR⁃199a⁃5p 是否通过 CD36 调 胞内TAG含量。

A B
#1 #2 CD36⁃3′ UTR
CD36 ORF 3′ UTR
#1 CD36 3′ UTR 5′⁃ GATGAGCCTACATATACACTGGC⁃3′
Location 22 miR⁃199a⁃5p 3′⁃ CUUGUCCAUCAGACUUGUGACCC⁃5′
1 000 2 000 3 000
#2 CD36 3′ UTR 5′⁃ AAATTTTTGTTTTCCCTCACTGGA⁃3′ Luciferase Ori
Location 355 miR⁃199a⁃5p 3′⁃ CUUGUCCAUCAGACUUGUGACCC⁃5′
C 2.0 ** D 100 000 * * E 300
Luciferase activity （firefly/renilla） 2.5 mRNA level/36B4 80 000 （μmol/g） 200 *
1.5
60 000
1.0
40 000
0.5
0 CD36 20 000 0 TAG 100 0
miR⁃199a⁃5p⁃mimic miR⁃199a⁃5p - - - + + + miR⁃199a⁃5p - - + - + + +
NC⁃mimic
-
CD36
-
+
CD36
A：The target of miR⁃199a⁃5p in the 3′ UTR region of CD36 mRNA was predicted by the miRDB website. B：The 3′ UTR region of CD36 mRNA
was cloned and inserted into the downstream of the PGL3 plasmid luciferase fragment. C：The expression levels of luciferase activity in Hepa1⁃6 cells after
miR⁃199a⁃5p overexpression were detected（n=6）. D：Overexpression efficiency of miR⁃199a⁃5p mimic and CD36 transfected in Hepa1⁃6 cells. E：After co⁃
**
*
transfection with overexpression of miR⁃199a⁃5p and CD36 in Hepa1⁃6 cells，the intracellular TAG content was detected. P < 0.05 and P < 0.01（n=3）.
图3 miR⁃199a⁃5p靶向CD36 mRNA的3′ UTR区域降低其表达水平
Figure 3 miR⁃199a⁃5p targeted the 3′ UTR region of CD36 mRNA to reduce its expression level

2.4 miR⁃199a⁃5p降低CD36的蛋白水平 成的以肝脏脂质过度累积为主要特征的临床病理
为深入理解miR⁃199a⁃5p在肝细胞脂质代谢中 综合征 ［22-24］ 。2020 年 Jacob George 基于过去 20 年
的作用，进一步探索了miR⁃199a⁃5p过表达引起的肝 的相关研究，提出了 NAFLD 更准确的命名：代谢相
细胞内TAG含量增加是否与脂代谢相关基因的转录 关 性 脂 肪 肝 病（metabolic associated fatty liver dis⁃
［25］
水平有关，以及miR⁃199a⁃5p是否直接调控CD36蛋 ease，MAFLD） 。MAFLD 对 NAFLD 的定义做了
白水平。在Hepa1⁃6细胞中过表达miR⁃199a⁃5p，检 进一步的明确，将肝脏脂肪变性同时伴随机体肥
测脂肪酸合成、氧化和摄取等关键基因的转录水 胖、T2DM 以及代谢失调 3 种特征之一的患者归于
平。结果显示，miR⁃199a⁃5p 的过表达并未对这些 MAFLD ［25-26］ 。随着生活水平的提高，MAFLD 在全
关键基因的转录水平产生影响（图 4A）。随后，检 球范围内的患病率逐年提高 ［27-28］ 。并且由于缺乏

测了脂代谢相关蛋白的表达水平，发现miR⁃199a⁃5p 直接的治疗药物，针对 MAFLD 发生、发展的研究
的过表达导致脂肪酸转运蛋白 CD36 的表达水平 格外重要 ［29-30］ 。

显著下降（图 4B、C）。以上结果提示，miR⁃199a⁃5p CD36 作为脂肪酸转运蛋白，在棕榈酰化修饰
的过表达降低了 CD36 的蛋白水平，减少肝细胞对 后定位于细胞膜上，负责脂肪酸的转运 ［31-32］ 。阮
脂肪酸的摄取。 雄中教授团队发现，在 NAFLD 患者肝脏中 CD36
的表达水平显著增加，且在小鼠肝细胞中特异性
3 讨 论
过表达 CD36 可以导致小鼠肝脏的脂质积累加
NAFLD 是指除酒精以及其他损肝因素外，造 重，证实 CD36 在早期 NAFLD 形成过程中发挥重