Page 11 - 南京医科大学学报自然科学版

第44卷第2期 李梦圆，王宇萌，徐青清，等. 活化α7乙酰胆碱受体促进LPS刺激的人牙髓干细胞牙/骨向分化［J］.
2024年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（2）：145-153 ·149 ·

A PNU⁃282987 B
3 3 CaCl2
0 μmol/L 0 mmol/L
nm ） 2 0.1 μmol/L nm ） 2 0.5 mmol/L
1.0 μmol/L
1.0 mmol/L
（ 450 10.0 μmol/L （ 450 2.0 mmol/L
25.0 μmol/L
1 D
50.0 μmol/L 1 D 4.0 mmol/L
100.0 μmol/L 8.0 mmol/L
0 0
1 3 5 7 1 3 5 7
Time（d） Time（d）
2+
图3 CCK⁃8检测不同浓度下PNU⁃282987（A）和Ca （B）对DPSC增殖的影响
Figure 3 The effects of different concentration of PNU⁃282987（A）and Ca （B）on the proliferation of DPSC as detected by
2+
the CCK⁃8

A PNU⁃282987
0 μmol/L 0.1 μmol/L 1.0 μmol/L 10.0 μmol/L

（ U/mL） 2.0
B 2.5 ***

1.5
ALP activity 1.0
0.5
0
0 0.1 1 10
PNU⁃282987（μmol/L）
A：ALP staining. B：ALP activity assay. *** P < 0.001.
图4 不同浓度PNU⁃282987作用于LPS刺激的DPSC时ALP表达的变化（×40）
Figure 4 Changes of ALP expression in DPSC stimulated by LPS treated with different concentrations of PNU⁃282987（×40）

2+
显示，与对照组相比，PNU ⁃ 282987、CaCl2、PNU ⁃ 2.7 活化α7⁃nAChR 联合 Ca 对炎症环境下 DPSC
282987+CaCl2组相关蛋白 COL⁃I、DSPP、OPN、ALP、 矿化基质形成能力的影响
茜素红染色结果显示，PNU⁃282987+CaCl2组、
RUNX2、OSX表达均升高，其中PNU⁃282987和CaCl2
联合后促进牙/骨向分化的效果提高最显著（图5）。 PNU⁃282987 组、Ca 染色程度均较对照组深，且
2 +
2+ PNU⁃282987+CaCl2组染色最深，矿化结节更明显。
2.6 活化α7⁃nAChR 联合 Ca 对炎症环境下 DPSC
牙/骨向分化相关基因表达的影响 10% CPC定量检测Ca 含量结果与染色结果一致（图7）。
2+
RT⁃qPCR检测成骨诱导后炎症的DPSC各组细 2.8 活化α7⁃nAChR 联合细胞外 Ca 促进细胞内钙
2+
胞中与成牙本质分化和成骨分化相关的基因（COL⁃I、 离子浓度增高
DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX）的表达。结果显示， 本 研 究 加 入 PNU ⁃ 282987、CaCl2 以 及 PNU ⁃
2+
与对照组相比，PNU⁃282987、CaCl2和 PNU⁃282987+ 282987+CaCl2到炎症DPSC后，细胞内Ca 荧光信号
CaCl2组牙/骨向分化相关基因表达升高，其中 PNU⁃ 的变化。在一定的时间范围内，PNU⁃282987组及细
282987+CaCl2最高（图6）。 胞外 Ca 组荧光强度增加，Ca 内流增多，二者联合
2+
2+