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第44卷第6期 张赟豪，韩博昂，王 瑜，等. SENP1在SPOP去SUMO化修饰中的作用研究［J］.
2024年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（6）：753-761 ·757 ·

还可以调控底物蛋白在细胞中的定位 ［18］ 。研究表 Spop在细胞中的定位（图3A、B）。
明，在 ccRCC 中 SPOP 错误定位在胞质中并大量累 为了进一步确认上述结果，利用免疫荧光技术
积，靶向与细胞增殖和凋亡有关的底物降解，导致 分别检测了内源 Spop 和外源 Spop 在 WT 和 Senp1 -/-
肿瘤增生 ［15］ 。为了研究去SUMO 化酶Senp1是否参 MEFs 中的定位情况。结果显示，在 WT 和 Senp1 -/-
与调控 Spop 的亚细胞定位，分离了 WT 和 Senp1 -/- MEFs 中，无论内源还是外源 Spop 的亚细胞定位都
MEFs 的胞核蛋白和胞浆蛋白，并分别检测其中的 与胞核高度重合，进一步表明 Senp1 并不影响 Spop
Spop蛋白水平。Western blot结果显示，在WT MEFs 在细胞核中的定位（图3C、D）。
中，Spop 蛋白主要定位在细胞核中，仅有少量蛋白 2.4 Senp1通过参与Spop的去SUMO化修饰实现对
存在于胞浆中；Senp1 MEFs 中 Spop 的分布情况与 Spop的蛋白调控
-/-
WT MEFs 基本一致，表明 Senp1 的敲除并不影响 初步确定 Senp1 能够上调 Spop 的蛋白水平后，

A B
1.0 Cytoplasm
Relative Spop protein level
WT Senp1 -/- Nuclear
C N C N 0.8
Spop 0.6
- 40 kDa

α⁃Tubulin - 55 kDa 0.4
0.2
Lamin B1 - 70 kDa
0
WT Senp1 -/-
C D
DAPI Spop Merge DAPI Flag⁃Spop Merge

WT WT

Senp1 -/- Senp1 -/-

A：Protein levels of Spop in WT and Senp1 MEFs were determined by Western blot after isolation of cytoplasmic and nuclear proteins. C：cytoplasm；
-/-
N：nuclear；Red arrow indicated Spop proteins. B：Western blot results were quantified and analyzed using Image J. C：Subcellular localization of
-/-
endogenous Spop protein in WT and Senp1 MEFs was determined by immunofluorescence. D：Immunofluorescence was used to detect the subcellular
-/-
localization of exogenous Spop protein（Flag⁃Spop）in WT and Senp1 MEFs. Scale bar=50 μm.
图3 Senp1不影响Spop的亚细胞定位
Figure 3 Senp1 did not affect subcellular localization of Spop

为了研究该过程是否通过影响 Spop 的 SUMO 化修 中过表达野生型Spop时，其蛋白表达量较WT MEFs
饰实现，首先对 Spop 的氨基酸序列进行了分析，在 减少，说明 Senp1 敲除后，Spop 的 SUMO 化修饰增
其MATH结构域中发现了2个潜在的SUMO化修饰 加，影响Spop 的蛋白水平。而当在Senp1 MEFs 中
-/-
位点，分别是第 95 位和第 110 位的赖氨酸（图 4A）。 过表达Spop突变体时，即Spop不能进行SUMO化修

随后构建了单 SUMO 化位点突变质粒 Flag⁃Spop⁃ 饰时，其蛋白水平相比WT MEFs不再减少（图4B）。
K95R、Flag⁃Spop⁃K110R 和双 SUMO 化位点突变质 2.5 SUMO 化位点突变 Spop 与 Sumo1 在细胞核中
粒 Flag ⁃ Spop ⁃ K95/110R，并 分 别 在 WT 和 Senp1 -/- 结合变弱
-/-
MEFs中进行过表达。结果显示，当在Senp1 MEFs 为了进一步研究Spop 蛋白的SUMO 化修饰，分