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第44卷第6期 徐若薇，韩一芳，周婷婷，等. 全人源抗大别班达病毒抗体的制备及功能鉴定［J］.
2024年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（6）：743-752 ·745 ·

电泳鉴定目的蛋白条带大小，Western blot 检测用 毒混合液 200 μL，孵育 2 h 弃去上清，加入 100 μL
6×His⁃Tag⁃HRP鉴定目的蛋白His标签。 DMEM维持培养基培养24 h，于-80 ℃反复冻融3次
1.2.9 抗体结合活性分析 裂解细胞，离心取培养基上清提取 DBV 核酸，通过
DBV经56 ℃水浴灭活30 min后，在生物安全柜 荧光定量PCR测得DBV病毒滴度。
6
中用DMEM维持培养基将DBV稀释至1×10 TCID50/
2 结 果
mL 作为 ELISA 包被抗原，封闭后加入初始浓度为
50 μg/mL 的待测抗体，二抗加入 1∶5 000 稀释的 2.1 SFTS恢复期患者血液样本收集
6×His⁃Tag⁃HRP，用酶标仪于450 nm处测定吸光度值。 2022 年 6 月—2023 年 11 月在南京医科大学附

1.2.10 抗体中和活性分析 属第一医院感染科收集的 25 例恢复期患者血液样
于 96 孔板培养 Vero 贴壁细胞 24 h 以上备用， 本被纳入研究。恢复期患者的诊断标准符合发热
细胞数量 1×10 个/mL 左右。用 DMEM 维持培养基 伴血小板减少综合征诊疗共识 ［12］ ，所有恢复期患者
4
3
将抗体稀释到 300 μg/mL，按照 1∶1 比例加入 DBV 血液中 DBV 载量<4.96×10 拷贝/mL 且体温恢复稳
（1×10 TCID50/mL）。同时设病毒对照、阴性对照 定 3 d 以上，样本 5、6、19 号的 PLT 与正常值相比较
3
和空白对照，均设 4 个复孔，于 37 ℃中和 1 h。吸 低，还处于恢复阶段，其余样本的 PLT 和 WBC 数量
去 96 孔板中的细胞培养基，每孔分别加入抗体和病 基本都符合标准（表1）。

表1 SFTS恢复期患者基本信息
Table 1 Basic information of SFTS recovery patients
Age DBV⁃RNA PLT WBC ALT AST LDH CK
Sample Sex
（years） （copies/mL） （×10 /L） （×10 /L） （U/L） （U/L） （U/L） （U/L）
9
9
01 48 Female < 4.96×10 3 251 04.69 037.9 040.8 - 169
02 74 Male < 4.96×10 3 272 05.16 012.2 013.4 137 024↓
03 49 Female < 4.96×10 3 136 16.11↑ 038.9 071.2↑ 407↑ 075
3
04 48 Female < 4.96×10 296 06.34 068.2↑ 083.1↑ - 123
05 73 Female < 4.96×10 3 094↓ 08.65 017.4 025.6 261↑ 023↓
06 69 Female 3.62×10 3 060↓ 03.20↓ 028.0 039.7 286↑ 034↓
07 48 Female < 4.96×10 3 447↑ 07.31 068.2↑ 013.7 258↑ 017↓
08 48 Male < 4.96×10 3 476↑ 04.27 075.3↑ 100.5↑ 393↑ 065
09 76 Male < 4.96×10 3 109↓ 06.33 073.5↑ 052.2↑ 298↑ 029↓
3
10 68 Male 3.47×10 489↑ 05.72 030.2 036.7 304↑ 052
11 49 Female 1.95×10 3 167 04.68 041.3 030.8 398↑ 042
12 57 Male < 4.96×10 3 186 05.00 044.0 023.5 237↑ 051
13 62 Male < 4.96×10 3 120↓ 03.61 034.1 028.7 221 080
14 61 Male < 4.96×10 3 195 03.35↓ 050.3↑ 020.7 284↑ 033↓
15 46 Male 2.81×10 3 189 06.79 187.8↑ 060.0↑ 285↑ 088
3
16 45 Male < 4.96×10 209 07.73 017.8 020.9 182 024↓
17 63 Male < 4.96×10 3 202 06.95 123.1↑ 048.4↑ 197 088
18 67 Male 2.06×10 3 395↑ 17.50↑ 075.6↑ 068.1↑ 443↑ 432↑
19 51 Female 3.77×10 3 073↓ 09.43 101.2↑ 032.9 200 042
20 76 Male < 4.96×10 3 142 03.78 090.7↑ 261.2↑ 499↑ 184
21 57 Male 3.70×10 3 225 05.52 018.5 025.7 253↑ 030↓
22 69 Male 1.22×10 3 162 06.83 250.7↑ 167.5↑ 470↑ 803↑
23 72 Female 4.16×10 3 330 04.50 018.0 043.0 445↑ 111
24 57 Male < 4.96×10 3 120↓ 04.40 024.3 022.2 162 034↓
25 48 Female < 4.96×10 3 216 04.14 026.5 018.5 198 074
9
3
The negative standard of DBV viral load：<4.96×10 copies/mL；the standard value of PLT：（125-350）×10 /L；the standard value of WBC：（3.50-9.50）×
9
10 /L；the standard value of ALT：9.0-50.0 U/L；the standard value of AST：0-45.0 U/L；the standard value of LDH：120-250 U/L；the standard value of
CK：40-200 U/L.