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第44卷第6期 徐若薇，韩一芳，周婷婷，等. 全人源抗大别班达病毒抗体的制备及功能鉴定［J］.
2024年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（6）：743-752 ·749 ·

表2 BCR测序统计
Table 2 BCR sequencing statistics

Number of cells with Reads mapped
Estimated Reads mapped Reads mapped Reads mapped
Sample productive V⁃J to any V（D）
number of cells to IGH（%） to IGK（%） to IGL（%）
panning pair J gene（%）
Healthy control 8 4 95.10 39.88 32.14 29.30
Sample group 1 6 4 00.14 00.05 00.06 00.04
Sample group 2 8 4 94.21 38.85 26.30 34.77
Sample group 3 7 2 04.30 01.88 02.38 00.10

2.6 抗体表达与Western blot鉴定 A B
kDa M 1 2 3 4 5 6 kDa M 1 2 3 M 4 5 6
将序列分析重组后获得 6 个单链抗体，原核表
170 170
达并用 Ni 亲和离子层析柱纯化出目的条带，均为 130 130
2+
100
100
包涵体蛋白，条带为 30 kDa 左右。通过脲素透析 70 70
55 55
均复性成功。抗体 HL13 电泳结果显示在 40 kDa
40 40
处仍有未除去的杂蛋白，纯化过程还需进一步优化 35 35
（图5A）。 25
25
因抗体的原核载体上具有6×His序列，取500 ng
15 15
蛋白经 12% SDS⁃PAGE 电泳之后用 6×His⁃Tag 抗体 10 10
对目的蛋白进行Western blot 鉴定，发现6个抗体在 A：Identification of antibodies by SDS⁃PAGE. B：Identification of
30~35 kDa 处均有明显单一的条带（图 5B），证明抗 antibodies by Western blot. M：Marker；1：HK11；2：HL13；3：HK14；4：
HL25；5：HK26；6：HK27.
体均表达成功。
图5 抗体表达与鉴定
2.7 抗体与DBV结合活性分析 Figure 5 Expression and identification of antibodies
候选抗体为一抗，6×His⁃Tag⁃HRP 为二抗。与
空白对照和pET28a空载阴性对照相比，发现6个候 因此将所有抗体进行细胞水平的体外病毒中和
选抗体对 DBV 均具有良好的结合活性（图 6），当抗 实验。由荧光定量 PCR 扩增图谱可见，HK11 抗
体浓度为50 μg/mL时，酶标仪450 nm处的吸光度值 体组的循环数（cycle threshold，Ct）大于病毒对照组
在1.5左右，根据吸光度值以及稀释倍数判断，抗体 （图 7A），则说明HK11抗体组病毒滴度小于病毒对
HK11与DBV的结合能力较强，抗体滴度也较高。 照组。分析各抗体组Ct值和病毒数量发现，当初始
3
2.8 抗体与DBV中和活性分析 病毒滴度为 1×10 TCID50/mL 时，6 个抗体对 DBV 均
6 个候选抗体均表现出与 DBV 的结合能力， 具有中和作用，抗体浓度为 300 μg/mL 时，抗体

A B
2.0 2.0 HK11
P < 0.01
HK13
HK14
1.5 HK25
HK26
nm） 1.5 HK27
Negative control
（450 D 1.0 nm） 1.0 Blank control
0.5 （450 D
0.5
0
Negative control 0 1 2 4 8 16 32 64 128
HK11 HL13 HK14 HL25 HK26 HK27
Blank control
Antibody dilution
A：The binding ability between different antibodies（50 μg/mL）and DBV. B：The binding ability between gradient diluted antibodies and DBV.
图6 候选抗体的DBV结合能力分析
Figure 6 Analysis of the binding ability between candidate antibodies and DBV