Page 10 - 南京医科大学自然版

第44卷第6期
·746 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年6月

2.2 DBV抗原表达 A B
kDa M NP kDa M NP
为获得活性稳定的 DBV⁃Gn 蛋白，本课题组将 170 170
130 130
Gn原始序列进行评估后去除信号肽和跨膜区片段， 100 100
70
70
获得优化后序列共 458 个氨基酸。将序列基因合
55 55
成并克隆到真核表达载体内，利用 CHO 细胞进行
40 40
真核表达，最后经纯化获得 Gn 蛋白，目的条带大小
35 35
55 kDa 左右（图 1A）。NP 蛋白条带为 35 kDa 左右，
25 25
超声破碎后在上清和沉淀中均有表达，使用 Ni 亲
2+
和离子层析柱纯化上清获得NP蛋白（图1B）。 15 15
2.3 SFTS恢复期患者血浆抗体检测 10 10
以 1∶50 稀释的待测恢复期患者血浆为一抗， A：DBV⁃Gn. B：DBV⁃NP. M：Marker.
Anti⁃Human IgG⁃Fc 片段为二抗，排除正常人血浆和 图1 DBV抗原表达鉴定
DBV抗原的非特异性结合，发现血浆中抗体与抗原 Figure 1 Expression identification of DBV antigen
DBV⁃Gn和DBV⁃NP均具有结合能力（图2A、B）。根 不同患者血浆的 DBV⁃Gn 抗体稀释倍数差异较大，

据450 nm处的吸光度值显示血浆中抗体与DBV⁃Gn 最低为1∶800，最高为1∶6 400（图2C）。
的结合能力高于DBV⁃NP。根据血浆稀释倍数发现 2.4 流式分选Gn特异性单个B细胞
血浆中DBV⁃Gn抗体的滴度明显高于DBV⁃NP抗体， 所有25例血液样本中，21号样本的DBV⁃Gn 和

A 2.0 B 0.6
Sample 2 Sample 2
Sample 5 Sample 7
Sample 7 Sample 8
Sample 8 Sample 10
1.5 Sample 10 Sample 17
Sample 16 Sample 19
0.4
Sample 21 Sample 20
nm） Sample 23 nm） Sample 21
HC
HC
（450 D 1.0 Control （450 D Control
Other samples
Other samples
0.2
0.5

0 0
50 100 200 400 800 1 600 3 200 6 400 50 100 200 400 800 1 600 3 200 6 400
Serum dilution Serum dilution
C
7 000
GBV⁃NP
6 000
GBV⁃Gn
Serum dilution 5 000
4 000
3 000
2 000
1 000
0
5 7 10 16 21 23 25 1 2 3 8 9 12 15 17 18 22 24 4 3 9 20 6 11 14
Sample
A：The binding ability of antibodies to DBV⁃Gn in plasma of SFTS recovery patients. B：The binding ability of antibodies to DBV⁃NP in plasma of
SFTS recovery patients. C：Titers of DBV⁃Gn and DBV⁃NP antibodies in the plasma of SFTS recovery patients. HC（Healthy control）：a healthy plasma
control group；Control：a blank control group；Other samples：recovery period samples without special labeling.
图2 SFTS恢复期患者血浆抗体检测
Figure 2 Detection of plasma antibodies in SFTS recovery patients